实验二 槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素.docVIP

PAGE PAGE 1 实验二 槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素 一、概述 植物来源：槐米系豆科植物槐树（sophora japonica L.）的花蕾（槐米），芦丁含量高达12%~20%。荞麦中含量也较高。含芦丁成分的植物高达70种以上。 功效：芦丁经药理实验证明具有调节毛细血管渗透作用，具有维生素P样作用。在临床上用作毛细血管止血药，常作为高血压病的辅助用药。芦丁为槐米中主要有效成分。 主要化学成分的结构及理化性质：芦丁（Rutin）也称芸香苷，是槲皮素3位上的羟基与芸香糖脱水缩合形成的苷(芸香糖为葡萄糖与鼠李糖组成的双糖)。分子式：C27H30O16·3H2O，淡黄色针状结晶，含三分子结晶水，熔点174～178℃,无水物为188~190℃。易溶于碱液，显橙黄色，酸化后又析出。在冷水中的溶解度为1：10000，热水中为1：200，在冷乙醇中为1：650，在热乙醇中为1：60，在吡啶中为1：12。微溶于乙酸乙酯和丙酮，难溶于苯、三氯甲烷、石油醚等极性小有机溶剂，可溶于硫酸和盐酸，加水稀释又可析出。UV：259，299，359nm。芦丁用20%H2SO4水溶液水解可得槲皮素（芦丁的苷元），呈黄色结晶，313～314℃，C15H10O7·2H2O，在热乙醇中溶解度为1：23，冷乙醇中1：290，难溶于水和苯等极性小的有机溶剂，可溶于极性较大的有机溶剂如甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。UV：255，269sh,301sh,370nm。 其他成分理化性质：皂苷（saponin）粗品为白色粉末，m.p.210～220℃。易溶于吡啶。能溶于200倍的甲醇，酸水解后获得两种苷元（白桦酯醇、槐花二醇）及糖（糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄糖醛酸内酯）。白桦酯醇（betulin）无色针晶，m.p215～217℃,能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、三氯甲烷、苯等；难溶于石油醚。槐花二醇（Sophoradiol）无色针晶，m.p219～220℃或 芦丁 MW664.6 (含三分子水) 槲皮素 MW338.3 （含二分子水） 实验部分 （一）实验目的要求 制备芦丁，供药用。 通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。 掌握黄酮苷水解制备黄酮苷元的方法。 熟悉重结晶技巧。 了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。 （二）实验的基本原理 芦丁的提取原理 利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。 2. 芦丁的分离原理 利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小，芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后就能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇-水法进行精制。 3. 芦丁的鉴定原理 （1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。 （2）通过专属的化学显色反应，确定芦丁的成分类型（黄酮类）。 (三) 实验内容 1. 用酸碱法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。 2. 在酸性条件下加热回流水解芦丁，制备槲皮素。 3. 溶剂重结晶纯化芦丁和槲皮素。 4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁和槲皮素 (四) 实验药材仪器与试剂 1. 实验药材 槐米20g。 2. 仪器：500ml烧杯，1000ml烧杯，250ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、减压过滤装置，布氏漏斗，层析缸等。 3. 试剂：硼砂、氧化钙、 HCI、H2SO4、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸等。 （五）实验方法与注意事项 1. 芦丁的提取 （1）方法一（碱溶酸沉法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，加0.4%硼砂水溶液200ml，用加热磁力搅拌器加热微沸后，加石灰乳（1.5g氧化钙加入10ml水研成乳液）调PH8~9，一边加一边搅拌，加热微沸30min，补充失去的水分，并保持溶液PH8~9，静置约5分钟过滤（或趁热抽滤），药渣（第二次提取）再用0.4%硼砂水溶液200ml煮沸半小时（此时不需加石灰乳），随时加水补充失去的水分，合并两次滤液（总体积约400ml），放冷（60~70℃），小心滴加浓盐酸，同时快速搅拌调制溶液PH4，室温放置或在冰箱中放置（过夜），沉淀，待全部沉淀物析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水（约10ml）洗涤芦丁粗品，抽干，室温下晾干，得粗制芦丁，称重，计算得率。 （2）方法二（水提取法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶