15色谱分析法概论.pptVIP

* 前提：试样中所有组分都产生信号并能检出色谱峰 依据：组分含量与峰面积成正比 ：优点 简便，准确 定量结果与进样量、重复性无关（前提→柱子不超载） 色谱条件略有变化对结果几乎无影响 缺点： 所有组分必须在一定时间内都出峰 必须已知所有组分的校正因子 不适合微量组分的测定 * （2）外标法：以待测组分纯品为对照物，与试样中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法 a．工作曲线法：i纯品→工作曲线，同体积样品与之比较 c 前提：进入检测器样品量与峰面积成正比 b．外标一点法：一种浓度对照物对比样品中待测组分含量 前提：截距为0，对照品浓度与待测组分浓度接近 外标法特点： 1）不需要校正因子，不需要所有组分出峰 2）结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大 →每次进样量应一致，否则产生误差 * 以一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称量的试样中，根据试样和内标物的重量及其在色谱图上相应的峰面积比，求出某组分的量 对内标物要求： a．内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质 b．内标物须为原样品中不含组分 c．内标物与待测物保留时间应接近且R1.5 （3）内标法 * 内标法优点： 进样量不超量时，重复性及操作条件对结果无影响 只需待测组分和内标物出峰，与其他组分是否出峰无关 适合测定微量组分 内标法缺点： 制样要求高；找合适内标物困难；已知校正因子 * （4） 内标对比法 配制一系列不同浓度的对照液，并加入相同量的内标物，进行分析，测得Ai和As，以Ai /As－浓度作图，得到标准曲线。 Ai /As * 内标对比法（已知浓度样品对照法）配制等量加入内标物的样品溶液和对照品溶液 内标对比法特点： 不需要校正因子 进样量对结果影响不大 * 比较 * 峰面积的测量 2．非正常峰（不对称峰） 1．对于正常峰 3．自动求和（自动积分仪或色谱工作站）： 直接给出A，h，W1/2 注：当色谱操作条件一定时，在一定进样量范围内 （不超载），W1/2与进样量无关 试样中各组分质量与其色谱峰面积成正比，即：W i = fi ·Ai 返回 * 1. 塔板理论 最早由Martin等人提出塔板理论，把色谱柱比作一个精馏塔，沿用精馏塔中塔板的概念来描述组分在两相间的分配行为，同时引人理论塔板数作为衡量柱效率的指标 * 塔板理论的四个基本假设 （i）色谱柱是由一系列连续、等距的水平塔板组成。在柱内每层塔板内部，组分可以在两相间迅速达到平衡。 （ii）流动相进入色谱柱不是连续进行的，而是间歇式前进，每次前进为一个塔板体积。 （iii）所有组分开始时存在于第1号塔板上，而且试样沿轴（纵）向扩散可忽略。 （iv）分配系数在所有塔板上是常数。 * 理论塔板高度和理论塔板数 H=σ2/L n=L/H n=16(tR/W)2 n=(tR/ σ)2 n=5.54(tR/W1/2)2 理论塔板高度(H)和理论塔板数(n)都是柱效指标。 σ或W1/2↓，H ↓，柱效↑ 用t’R代替tR计算塔板数，称为有效理论塔板数(nef)；求得的塔板高度为有效理论塔板高度（Hef） * 从上两式可以看出： 1：色谱峰W越小，n就越大，而H就越小，柱效能越高。因此，n和H是描述柱效能的指标。 2：在同一色谱柱上，不同组分得到不同的理论塔板数，同一组分在不同色谱条件下理论塔板数也不相等。 n=16(tR/w)2 n=L/H * 2. 速率理论 1956年荷兰学者范第姆特（Van Deemter）等在研究气液色谱时，提出了色谱过程动力学理论——速率理论。他们吸收了塔板理论中板高的概念，并充分考虑了组分在两相间的扩散和传质过程，从而在动力学基础上较好地解释了影响板高的各种因素。该理论模型对气相、液相色谱都适用。范第姆特（Van Deemter）方程的数学简化式为 式中u为流动相的线速度；A，B，C为常数，分别代表涡流扩散项系数、纵向扩散项系数、传质阻抗项系数。 现分别叙述各项系数的物理意义。 * （1）涡流扩散项的概念 在填充色谱柱中，当组分随流动相向柱出口迁移时，流动相由于受到固定相颗粒障碍，不断改变流动方向，使组分分子在前进中形成紊乱的类似“涡流”的流动，故称涡流扩散。 （动画） * 涡流扩散项的影响因素 1:涡流扩散项与填充物的平均直径的大小和填充不规则因子有关，与流动相的性质、线速度和组分性质无关。 2:为了减少涡流扩散，提高柱效，使用细而均匀的颗粒，并且填充均匀是十分必要的。对于空心毛细管，不存在涡流扩散。因此A＝0。 A = 2λdp dp：固定相的平均颗粒直径 λ：固定相的填充不均匀因子 * （2）纵向扩散项的概念 纵向扩散是由浓度梯度造成的。组分