低温胁迫对黄姑鱼生理生化指标和hsp70下基因表达模式的影响-海洋生物学专业毕业论文.docxVIP

浙江海洋大学 浙江海洋大学 论文原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的 研究成果。文中依法引用他人的成果，均己做出明确标注或得到许 可。论文内容未包含法律意义上己属于他人的任何形式的研究成果， 也不包含本人己用于其他学位申请的论文或成果。 本人如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果： 1．交回学校授予的学位证书； 2．学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报； 3．本人按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉 损害，进行公开道歉； 4．本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。 论文作者签名：弩毗讪 日期：文h如年岁月二g Et 万方数据 浙江海洋大学 浙江海洋大学 论文知识产权权属声明 本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权 归属浙江海洋大学。学校享有以任何方式发表、复制、公开阅览、 借阅以及申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或与该 论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为浙江海洋大学。 学位论文作者签名：嘶u 指导教师签名： 日期：＆b，6年土月母日 日期：出以年多月1湘 万方数据 《：中国博士学位论文全文数据库》和中国优秀硕士学位论文全文数据库》投稿声明 《：中国博士学位论文全文数据库》和 中国优秀硕士学位论文全文数据库》投稿声明 研究生处： 本人同意《中国博士学位论文全文数据库》和《中国优秀硕士 学位论文全文数据库》出版章程的内容，愿意将本人的学位论文委 托研究生处向中国学术期刊(光盘版)电子杂志社的《中国博士学 位论文全文数据库》和《中国优秀硕士学位论文全文数据库》投稿， 希望《中国博士学位论文全文数据库》和《中国优秀硕士学位论文 全文数据库》给予出版，并同意在《中国优秀博硕士学位论文全文 数据库》和《中国优秀硕士学位论文全文数据库》以及CNKI系列数 据库中使用，同意按章程规定享受相关权益。 ／ 论文级别： 切，硕士 口博士 n 学位论文作者签名弩批 指导教师签名： 弗 日期：6b，‘ 年皇月坶日 日期： 9-6，‘年}月二9日 作者联系地址(邮编)：勰甬枥u咩望砂可扫≤l习绶 作者联系电话： f％；6罗。y佃纩 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 为了研究黄姑鱼(Nibea albiflora)在低温胁迫下行为表现、组织学、生理生化 指标、以及相关耐寒基因表达的变化。通过实验生态学方法确定黄姑鱼的半致死低温， 并研究低温胁迫对黄姑鱼行为表现、组织学指标和相关生理生化指标的影响，进一步 克隆分离了黄姑鱼热应激蛋白70(Hsp70)基因核心序列并研究了其组织分布以及其 在低温胁迫下基因和蛋白水平的表达差异。研究结果如下： (1)以18℃为对照组，设置5．5℃、6．5℃、7．5℃和8．5℃三个低温组，确定了 黄姑鱼幼鱼12h对应的半致死温度并表征了极端低温下黄姑鱼组织及行为表现方面 的变化。结果表明：水温5．5。C和6．5℃条件下，实验鱼在短时间内便出行为异常并分 别在6h和9h内全部死亡。水温7．5℃条件下，实验鱼则在应激反应17min后有一个 恢复身体平衡的过程，处理12h后半数实验鱼死亡；而8．5℃组和对照组则表现正常。 因此确定了18℃驯养条件下黄姑鱼12h对应的半致死温度为7，5℃。取对照组(18。C) 和低温处理组(7．5。C)鱼肌肉和鳃进行组织学石蜡切片，并拍照观察发现低温胁迫 能导致鳃丝肿大、血管堵塞、鳃小片出现水样变质、空泡性恶化、表皮细胞大量破损 等一系列症状。而肌肉组织则出现肌纤维肿大、肌纤维间隙扩大，排列疏松等现象。 说明极端低温能造成黄姑鱼组织的严重损伤。 (2)以18。C为对照组，设置8。C、10。C和14℃三个低温胁迫组，测定不同温度 急性胁迫对黄姑鱼幼鱼超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及Na+／-K+．ATP 酶活力的影响。研究结果表明，低温胁迫组(8。C、10℃和14℃)的SOD和CAT酶 活力随着胁迫温度的降低及其胁迫时间的延长呈先升高后降低的趋势，在72h时恢复 到对照组水平。肌肉中的Na+／一K+．ATP酶活力则随处理时间的延长呈现先降低后升高 的趋势，10。C和14。C组能够在72h时恢复到对照组水平，而8。C组则在72h仍显著低 于对照组。由此说明，SOD、CAT以及Na+／．K+．ATP参与了黄姑鱼低温胁迫应答过程， 可以作为其低温胁迫应答的标志物。 (3)采用RT-PCR的方法分离克隆出了黄姑鱼Hsp70基因cDNA核心序列，共 2143bp，包括5’非编码区128bp、编码区1917bp以及3’非编码区98bb，同源性分析 表明，黄姑鱼Hsp70氨基酸序列与大黄鱼、鲵鱼等动物相似性高达99％。通过半定 量R