2微生物发酵产酶.pptVIP

酶的生产方法 提取分离法 血液中提取SOD；木瓜中提取木瓜蛋白酶；动物胰脏中提取胰蛋白酶。来源：器官、组织、细胞。 受到生物资源、地理环境、气候条件的影响。 生物合成法 微生物发酵产酶；（枯草芽孢杆菌生产淀粉酶、蛋白酶、磷酸酶；曲霉产糖化酶等） 植物细胞培养产酶；动物细胞培养产酶。 化学合成法 成本昂贵，效果不好。一般只用于实验室研究 章节内容 一、酶生物合成调节理论 原核生物的调节理论 乳糖操纵子理论（Jocob Monod,1960） 乳糖操纵子模型 原核生物的调节理论 细胞内分解葡萄糖的酶类属于组成酶，当同时存在葡萄糖和乳糖时，细胞能够优先分解葡萄糖，其中产生了阻碍乳糖操纵子转录的因子，这种阻遏因子与cAMP-CAP的结合有关。 葡萄糖效应模型 原核生物的调节理论 原核生物的调节理论 章节内容 本章内容 用枯草芽胞杆菌AS1.3398生产中性蛋白酶 温度控制 发酵时间 发酵单位 ?变温 0-4h 30-30℃ 4-8h 32-40℃(2℃/h↑) 8-12h 40-32℃(2℃/h↓) 12h后 30-32℃ 26.5h 7100u/ml 恒温 30-32℃ 27h 4275u/ml 本章内容 1、酶生物合成的模式 总结 理论应用 目的：提高产酶率和缩短发酵周期 最理想的合成模式：延续合成型 策略措施： 提高mRNA的稳定性：菌株选育；降低产酶温度 解除阻遏：培养基中解除阻遏物；变诱导型为组成型 2、发酵动力学 2.1 细胞生长动力学 Monod方程 Ks和μm值随菌种、限制性基质种类的变化 2.2 产酶动力学 本章内容 本章重点掌握内容 1950年，法国的莫诺德(Monod)首先提出了表述微生物细胞生长的动力学方程，用以反映限制性基质浓度与细胞生长速率的关系： μm：为最大比生长速率 S： 限制性基质的浓度 KS ：莫诺德常数 μ 限制性基质浓度(S) 比生长速率(μ) KS 当限制性基质的浓度SKs时，增加基质浓度可提高细胞比生长速率。 当限制性基质的浓度S=Ks时，细胞比生长速率达到最大比生长速率的一半。 当限制性基质的浓度SKs时，增加基质浓度就不能提高细胞比生长速率。 μ 限制性基质浓度(S) 比生长速率(μ) 此方程式与米式方程非常相似 KS Monod方程的参数求解(双倒数法)： 将Monod方程取倒数可得： 或： 通过测定不同限制性基质浓度下，微生物的比生长速率，就可以通过回归分析计算出Monod方程的两个参数Ks和μm 。 S/μ S ( y = ax + b ) 当x=0时，y=Ks/μm 当Y=0时， x=-b/a=-Ks Ks/μm Ks 实例分析计算 1. 设定不同浓度的限制性基质浓度，培养细菌，得到相关细胞数量的试验数据 2. 选定对数生长期的几组数据，得到不同基质浓度与比生长速率的线性回归方程，求出对应的比生长速率。 细胞比生长速率: 对上式积分得：InX = μt + A0 (A0为积分常数，等于接种量的自然对数) 根据几组试验数据中的培养时间和细胞数量得到一线性回归方程，求出比生长速率 浓度1时的数据 浓度2时的数据 … … 根据各组试验数据中的培养时间和细胞数量得到一系列线性回归方程，求出对应的比生长速率。 3. 整理试验数据，求出Monod方程 S(mg/L) 6 33 64 153 μ(h-1) 0.06 0.24 0.43 0.66 原始数据 整理数据 S/μ(y) 100 137.5 192.5 231.8 S (x) 6 33 64 153 ( y = ax + b ) 通过第2步得到一个基质浓度（S）对应的一个比生长速率（μ） 发酵生产考虑：