第六章体外分析.ppt

* 4. 操作简便，商品化程度高： RIA所需试剂品种不多，便于制成配套试剂盒； 加样程序简单,一次能分析大量标本； 反应时间不长；测量和数据处理易于实现自动化； RIA属体外分析技术，对患者无任何辐射危害。 操作简便，成本低。血清、血浆、体液、组织匀浆等样品不加提纯就可直接测量。 * 四、RIA的质量控制 一个理想的、没有误差的“完美”测定，应该是标本样品的分析物无论是在一次测定中的任何位置，无论是重复测定几次，甚至在不同实验室所测得的结果都是一样的，而且所测值就是这个样品的真值。 但是，在实际工作中，这种理想的测定是不可能达到的。 任何一种分析方法都会产生误差。 * 一个完善的质量控制体系应包括两个环节： 1. 生产厂家应该建立严格的质量检测程序。 2. 实验室应该有严格的质量控制体系。包括实验室内部质量控制和实验室间的质量控制。 * （一）误差的分类和来源： 根据来源不同的误差，可以把实验中产生的误差分为两类： 系统误差 随机误差 * 1. 系统误差： 是由于试剂、仪器或操作方法上一个固定的缺陷而造成整批结果倾向性的偏差，影响了结果的正确性。 系统误差引起的测定结果的偏差是固定的偏大或偏小。 系统误差是可以避免的。 * 2. 随机误差： 是由于实验过程中各种偶然因素造成同一样品多次测定的结果不一致。 误差的出现是随机的，与真实值的偏离是双向性的，可大可小。 随机误差无法避免。 * （二）质量控制 质量控制就是使用合适的方法以检查、表示和消除来自试剂药盒和测量体系的误差，并使这种误差降低到某一允许水平。 具体作用有： 1．检查误差的程度，决定测定结果的取舍。 2．识别误差的来源并消除其原因。 3．改进测定方法的设计以提高质量。 * （三）RIA质量控制指标 包括实验室内部质量控制和实验室间的质量控制。 实验室内部的质量控制侧重于对检测质量的控制，保证从样品收集到发出结果报告的整个过程中能及时发现各种误差，并分析原因，找出纠正的方法。 质量控制的指标包括： 精密度、准确度、灵敏度、特异性、稳定性 * 1. 精密度（precision）： 精密度是指在一定条件下，同一实验方法对同一样品多次重复测定所得到的结果之间的离散程度，即结果的一致性。 主要反映随机误差的大小。 主要用变异系数或绘制精密度图的方法来评价。 * 2. 准确度（accuracy）： 是指测量值与真值的符合程度，其偏离真值的误差就叫做偏差。 在实际工作中我们用设置质控样品、测定回收率或进行健全性评价的方法来判断准确度。 * （1）质量控制样品 质量控制样品是含有已知剂量待测物的血清样本。 质控样品和待测样品为同一种物质，具有相同的生物和免疫活性。 质控样品的浓度应准确定量并有合理的浓度范围。通常是根据待测物在人体血清内的正常浓度制定高、中、低三个剂量水平的质控样品。 使用时将质控样品分置在待测样品的不同位置中同时检测。 * （2）回收率的测定： 设置回收管和对照管，在对照管中加入待测样品，回收管中加入等量待测样品和已知量的分析物，经过反应后计算其回收率。 一般的回收率的要求是90％～110％。 * （3）健全性评价： 主要用于评价标准品与待测样品的免疫活性是否一致。 用反应缓冲液将样品稀释成不同的剂量，绘制样品稀释曲线，如果样品与标准品免疫活性相同，得到的曲线应该是一组平行的曲线，所以又称为平行性实验。 * 3. 灵敏度（sensitivity）： 是指RIA方法刚能与不含有标准抗原的零标准管在统计学上区别开来的抗原最低剂量，即该RIA方法的最小可检测量。 确定灵敏度的方法主要有： ①同一样品10次测量结果的B/B0＝90％的剂量的平均值作为最小可测量。 ②以10次测量结果的B0管结合率均值减去2SD（标准差）的结合率的剂量对应值为最小可测量。 * 4. 特异性： 方法的特异性主要取决于抗体的特异性。 用抗体的交叉反应率来表示。 5. 稳定性： 测量结果的稳定性可以通过剂量反应曲线的各个参数的稳定性来间接反映。 如标准曲线的斜率和截距，零标准管结合率的75%、50%、25%处的剂量值(ED75、ED50、ED25等)。 * 五、RIA的方法学 （一）反应方式： 1. 平衡加样法：也称一步法，是将非标记抗原、标记抗原和抗体同时加入反应体系进行反应。 优点：使非标记抗原、标记抗原两者与抗体有相同的反应几率，操作方便，精密度较好，稳定性好。 缺点：反应时间长，灵敏度较差。 * 2. 顺序加样法：先将非标记抗原与抗体温育反应一定时间（6～24小时），形成抗原抗体复合物后，然后再加入标记抗原短时间（1～4小时）温育后中