SN-0296-1993 出口禽肉中莫能菌素残留量检验方法 生物自显影法.pdf

食品标准网（Http:// ） SN 0296-1993 出口禽肉中莫能菌素残留量检验方法生物自显影法 1994年5月1 日实施 1 主题内容与适用范围 本标准规定了出口禽肉中莫能菌素残留量的抽样、制样和生物自显影测定法。 本标准适用于出口冻鸡中莫能菌素残留量的检验。 2 抽样和制样 2.1 检验批 以不超过2500件商品为一检验批。 同一检验批的商品应具有相同特征,如包装、标记、产地、规格和等级等。 2.2 抽样数量 2.3 抽样方法 按2.2规定的抽样件数随机抽取,逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品,原始样品总量不少于2kg, 放入清洁容器内,加封后标明标记,及时送交实验室。 2.4 样品制备 从每袋原始样品中取出部分有代表性样品,将可食部分放入高速组织捣碎机中捣碎均匀,充分混匀,用 四分法缩分出不少于1kg试样。装入清洁容器内,加封后标明标记。 2.5 样品保存 将试样于—18℃冷冻保存。 注：在抽样及制样过程中,必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 3 测定方法 3.1 方法提要 用甲醇提取肉样中莫能菌素,经四氯化碳萃取后浓缩至干,以甲醇溶解残留物,用薄层分离,再用生物自 显影法测定。 3.2 设备和材料 3.2.1 微量注射器：50 μL。 3.2.2 薄层板：硅胶,Q/YT 257—85SG,5cm×20cm,使用前110℃活化2h。 3.2.3 展开缸：240mm×57mm×32mm。 3.2.4 游标卡尺：测量范围0～200mm,精度0.02mm或使用抑菌圈测量仪测量。 3.2.5 离心机：转速3000 r/min。 3.2.6 旋转浓缩器。 3.2.7 恒温培养箱：37±1℃。 3.2.8 高压灭菌器。 3.2.9 长方形培养皿：20cm×10cm×5cm。 1 食品标准网（Http:// ） 3.2.10 均质器：带均质杯250mL。 3.3 试剂和培养基 3.3.1 试剂 甲醇：分析纯。 四氯化碳：分析纯。 乙酸乙酯: 分析纯。 莫能菌素标准品: 960μg(效价)/mg(中国兽药监察所提供)。 试验菌种：枯草杆菌(Bacillus subtilis), 菌种号ATCC 6633(卫生部药品生物制品检定所提供)。 3.3.2 培养基 菌种用培养基(见附录A 第A1章)。 生物自显影用培养基(见附录A第A2 章)。 肉汤培养基(见附录A第A3 章)。 3.4 测定步骤 3.4.1 工作液制备 莫能菌素标准贮备液 准确称取适量的莫能菌素标准品,用甲醇溶解配制成浓度为500μg(效价)/mL的莫能菌素标准溶液。配 制后于冰箱中保存,一周内使用。 莫能菌素标准工作液 吸取标准贮备液,用甲醇分别稀释成2,3,4,5,10和15μg(效价)/mL的标准工作标准液。以上稀释液均 须当日配制。 菌种培养及芽胞菌悬浮液制备 将菌种安瓿瓶的上部消毒后敲碎,加入少量肉汤培养基,使其溶解并移至肉汤管中混匀。置37±1℃温 箱中培养24h。将培养物接种于菌种培养基中,置于37±1℃培养一周,镜检含芽胞菌数达85%以上, 便可制 备芽胞悬浮液。 用适量灭菌生理盐水冲洗菌苔,然后将该菌液转移至离心管中,充分摇匀后,于3000r /min离心30min, 弃去上清液,再加入同样量的灭菌生理盐水重复离心一次。弃去上清液,再加入适量灭菌生理盐水,摇匀后于 65℃水浴中加热30min,然后,于1000 r/min离心5min, 取上清液并转入灭菌试管中,即为芽胞菌悬浮液, 置于冰箱中保存,可使用一个 月。 3.4.