流式微球联合检测炎症因子-临床检验杂志.doc

流式微球联合检测炎症性因子 IL-6、TNF-α和MCP-1方法学的建立和评价 令狐颖1 张程2 陈艳2 黄山基金项目：贵阳市科技局社会发展领域科技攻关项目[2010]筑科农合同字第1-社-35号和贵州省卫生厅立项资助项目[Gzwlj2009-1-007] 基金项目：贵阳市科技局社会发展领域科技攻关项目[2010]筑科农合同字第1-社-35号和贵州省卫生厅立项资助项目[Gzwlj2009-1-007]。 *通讯作者。 （1.贵州省人民医院临床检验中心，贵州贵阳 550002；2.贵阳医学院09级硕士研究生；3.本院心内科） 【摘要】 目的 建立流式微球分析技术联合检测人血清中细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和单核细胞趋化因子-1（MCP-1）的方法并对其进行系统性评价。方法 分别将三种选择好一定浓度的捕获抗体（IL-6、TNF-α和MCP-1鼠抗人单克隆抗体）包被在三种已激活的不同荧光强度编码的羧基化聚苯乙烯微球上，用正交试验对试验条件进行优化选择，并应用CLSI的有关规则进行方法学评价。结果 实验选择各种捕获单克隆抗体的加入量为10μg，各种生物素标记的羊抗人单克隆抗体的稀释倍数为1:540，第一次反应时间为2h、洗涤二次，PE标记亲和素的稀释倍数为1:1000，第二次反应1h洗涤一次。方法学评价显色： IL-6线性范围是1.13—3333.33 pg/mL，批内变异系数为1.98%—2.31%，批间变异系数为3.52%—4.17%，准确度相对偏倚为0.19%—0.66%，回收率是95.4—101.5%，灵敏度为1.13 pg/mL； TNF-α线性范围是1.07—1111.11 pg/mL，批内变异系数为2.67%—2.90%，批间变异系数为4.27%—4.91%，准确度相对偏倚为0.85%—1.53%，回收率是97.3—104.2%，灵敏度为1.07 pg/mL； MCP-1线性范围是7.07—3333.33 pg/mL，批内变异系数为2.63%—2.92%，批间变异系数为3.70%—4.23%，准确度相对偏倚为0.15%—1.06%，回收率是95.2—104.3%，灵敏度为7.07 pg/mL.高浓度的甘油三酯、胆固醇和胆红素对三种因子有一定的干扰率，低浓度的甘油三酯、胆固醇和胆红素对三种因子干扰较小。分别与ELISA方法比较无显著差异。结论 自建的IL-6、TNF-α和MCP-1流式微球联合检测技术，可拓展流式细胞分析技术，值得临床推广使用。 【关键词】流式微球分析技术（CBA）； 联合检测；细胞介素-6（IL-6）；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）；单核细胞趋化因子-1（MCP-1）) Development and evaluation of a Cytometric Bead Assay Multiplex Detection Method for the detection of IL-6、TNF-αand MCP-1 LING-Hu ying1,HUANG Shan1，ZHANG Cheng2, CHEN Yan2, XU Jian1，LIU Zhi-qin3 (1. Guizhou Province Center for Clinical Laboratory;2.Guiyang Medical College;3. Guizhou Province Peoples Hospital) 【Abstract】 Objective To development and Systematic review of a cytometric bead array Multiplex Detection Method for the detection of IL-6, TNF-α and MCP-1. Method A certain concentration of three kinds of capture antibody (mouse anti-human IL-6 monoclonal antibody, mouse anti-human TNF-α monoclonal antibody, mouse anti-human MCP-1 monoclonal antibody) were respectively coated with three kinds of activated beads, and according orthogonal experiment to select the best test conditions, and applying the relevant rules of CLSI to methodology evaluation