微生物基因工程第六.pptVIP

第六章 外源基因的表达 6.1 基因表达的机制 6.1.1 外源基因的起始转录 6.1.2 mRNA的延伸与稳定性 6.1.3 外源基因mRNA的有效翻译 6.1.4 表达蛋白在细胞中的稳定性 6.1.5 目的基因沉默 6.1.1 外源基因的起始转录 选择可调控启动子和相关调控序列 原核生物：诱导型启动子和组成型启动子 诱导型启动子：lac、trp、 PR、PL、tac 组成型启动子：T7 真核生物：启动子和增强子 6.1.2 mRNA的延伸与稳定性 外源基因起始转录后，保持mRNA的的有效延伸、 终止及稳定存在是外源基因有效表达的关键。 在构建表达载体时，尽量避免衰减子序列、加入抗终止序列，转录终止序列、poly(A)掺入位点（真核生物）。 选择RNase缺失受体菌（原核生物）。 6.1.3 外源基因mRNA的有效翻译 在原核细胞中影响翻译的起始因素有：起始密码子、核糖体结合位点（SD序列）、起始密码与SD序列之间的距离和碱基组成、mRNA的二级结构、mRNA上游的5′非翻译序列和蛋白质编码区的5′端序列等。 外源基因mRNA有效翻译须考虑的基本原则 原核生物 真核生物 6.1.4 表达蛋白在细胞中的稳定性