蛋白酶产生菌的筛选.doc

蛋白酶产生菌的筛选 组别：第*组 班级：生工**班 组员：*** 指导老师：*** 一、实验目的 学习从自然界中分离蛋白酶产生菌 二、实验内容 蛋白酶产生菌的分离 三、实验原理 许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是最常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到奶粉培养平板并进行培养，根据奶粉平板的水解圈做初筛。将初筛的蛋白酶产生菌接入产酶培养基振荡培养，测定蛋白酶的活力，最终得到产蛋白酶的芽孢杆菌。也可直接将细菌接种到奶粉培养平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。 四、实验材料和用具 1.材料：土壤样品 2.试剂：牛肉膏蛋白胨培养及平板、奶粉培养基平板、45mL无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液、 3.仪器及用具：紫外分光光度计、显微镜、恒温水浴锅、摇床、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒、容量瓶、漏斗、试剂瓶、漏斗、载玻片、滤纸、擦镜纸。 五、操作步骤 （一） 配制所需培养基 按照以下配方配制所需的培养基 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g，琼脂 1.5～2.0g，水 100ml，pH 7.2 配制200mL 奶粉培养基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g， 琼脂 2.0g，水 100ml，pH 7.0～7.2 脱脂奶粉 3g （二） 分离 1.采集土壤样品，用无菌水植被1:10土壤悬液。 2.取1:10土壤悬液5 mL，注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75～80℃ 3.取加热处理过的土壤悬液100～200μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养平板，后将平板倒置，于30～32℃ 4.对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。 （三） 筛选 1、从判定为芽孢杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种奶粉斜面培养基，再转接奶粉培养基平板上，30～32℃ 2、选择水解圈直径与菌落直径比值大的菌，接入牛肉膏蛋白胨培养基30-32℃ 六、实验结果： 相关图片： （2）菌株的分离 根据菌落大小、形状、表面光泽、隆起程度、透明程度、边缘性状和菌落颜色的差别，最终从培养基上筛选出23个菌落。 （3）将分离到的菌株分别接种到含脱脂奶粉的培养基上，置于32℃培养60h，于室温下观察是否产生细胞外蛋白酶，分解培养基中的脱脂牛奶，进而产生肉眼可见的水解透明圈。结果表明，在接种的23株菌落中，共有 菌株编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 比值 ++ ++ + ++ ++ + + + + 说明：“+”表示：水解圈与菌落直径比值约为3：1，“++”表示：水解圈与菌落直径大于3：1.。 六、结果分析 在奶粉培养基平板上，蛋白质被孢芽杆菌产生的蛋白酶水解，形成透明圈（见实验相关图片）。不同种类的微生物产生的蛋白酶的种类和活力各不相同，起对奶粉中蛋白质的水解能力各不相同，所形成的水解圈与菌落大小比值故而不同，因而根据其比值可初步断定其对奶粉中蛋白质的水解能力。 组员签字：