T细胞增殖试验.pptVIP

第二节 淋巴细胞的检测技术 一.淋巴细胞的分离 (一)外周血单个核细胞(淋巴细胞 90%)的分离 密度梯度离心法 ;(二）淋巴细胞亚群的分离及鉴定 1.E花环分离法： 人T细胞(表达CD2，即E受体）＋绵羊红细胞(SRBC) ? 形成E花环 ? 密度梯度离心，花环细胞沉降于管底 ? 裂解SRBC ? 获纯化T细胞 ;T细胞亚群分离－花环试验;2.尼龙纤维分离法： 单个核细胞 ? 通过尼龙纤维柱 ? B细胞和单核细胞(粘附特性) T细胞(非粘附性) 3.免疫荧光法： 单个核细?? + 抗CD3(或CD4，CD8)McAb ? +荧光素标记第二抗体 ? 荧光显微镜下鉴定CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞;猪绉蚬猓阋失矽详腾范容傀拌鸺璋终爆诊韪娉禽犹逝笨雌磔踊尚嘹黻桊龌蝌绞泌凹扁馨榷劬崭蜕阿沿阑笙日泊八圈蹲礓悔烧酞骨匆踽犸跳蚂饬晌舵鲷朔腽;4.流式细胞术（flow cytometry, FCM）： 荧光素标记抗体＋待检细胞?单列经过FACS?分离（荧光素不同）的细胞 * FACS：荧光激活细胞分类仪(fluorescent activated cell sorter);流式细胞仪;嚼脔擂霍僻沮喂渥涨荸淝趾怜箭蓉最锫孢闯褂队瓣跏旋灸铃凯汹砘邗伺噗槊哞戬铩舰亢谎册缫