小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验.ppt

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验 原 理（体外法） 巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状态。 本实验拟检测小鼠腹腔巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功能。 材 料 1．小白鼠 2．白色念珠菌液（美兰染液着色） 3．6％可溶性淀粉肉汤 肉汤培养液100 m1，加入可溶性淀粉6g，混匀后煮沸灭菌 4．小鼠解剖器械、显微镜、离心机、温箱等 5．试管、吸管、微量加样器、计数板 方 法 (1)、小鼠巨噬细胞制备 实验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1ml。实验时眼球放血、断椎处死小鼠，新洁尔灭浸泡5分钟。 剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一小口(注意避开血管)，用1640灌注腹腔，收集腹腔液于试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清，沉积细胞用1640离洗一次。最后沉积细胞用含10％小牛血清1640配成适当浓度备用(1-2×106／ml)。 （2）白色念珠菌制备 将白色念珠菌接种于沙氏平皿培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，10