清洁水体与污染水体中微生物群落分布的测定.docVIP

《环境微生物学》综合性实验 ——清洁水体与污染水体中微生物群落分布的测定 陈凡 20102400037 10环科 组员： 陈凡 傅永邦 李炬华 李骏斌 曾锦萍 何浩斌 摘要：随着工业化和城市化进程的加快，我国河流普遍受到了不同程度的水质污染，而微生物指标对于水质评价具有重要作用。本实验在官洲河中选择清洁与污染区域分别进行采样，然后测定水体中微生物的种类和数量，染色观察，分析两种水体中微生物群落的分布特点以 及污染物对水体中微生物群落的影响。 关键词：官洲河、微生物、污水处理、分离纯化 1 前言 在水生生态系统中, 水生生物是物质循环和能量流动的中心环节。 任何生态因子的变化都会使水生生物的群落结构发生相应的改变, 反过来也可以通过了解生物群落的变化来了解水体的水质状况。特别是在水体污染的情况下,生物群落结构发生变化比自然条件下更加复杂、更加剧烈。通过对生物的个体生态系、种群生态系和群落生态系的研究, 便可以了解生物体所处的环境特征, 反映水质的瞬时变化, 也可以连续观测水质变化, 反映低浓度污染物对生物体的潜在危害。[1] 本实验对官洲河的对照断面、控制断面、削减断面三个断面水体的微生物现状进行调查与分析, 并进行科学评价。 实验方案与思路 2.1水样的抽取与保存 2.2水样微生物的观察 2.3制备培养基 2.4水体微生物分离纯化 2.5单菌种的扩大培养，在三角瓶中液体培养基培养 2.6菌种初步鉴定 3 实验方法 3.1 水样的抽取与保存 3.1.1抽取水样 根据上图，分别在官洲河排污口的上游（对照断面），污水处理厂下游（控制断面）及下游较远处（消减断面）取水样，用绳子绑住准备好的矿泉水瓶丢到河中央取水，水瓶不能装太满，大约2/3瓶，因为需留适量空气在瓶中防治水样中微生物过早死亡，并盖紧盖子以防污染；取水时间为早上10点至11点；所取水为表层水样。 以下为取水位置： 3.1.2 水样的保存 为防止微生物发生质的改变, 装好的样品瓶要在绝热箱中运送。当外界温度较高时还要冷却, 采样容器也不要受任何直接阳光照射, 以免紫外线杀死微生物。采好的水样应立即送往实验室, 一般从取样到检验不宜超过两小时, 否则应使用10oC以下的冷藏设备保存样品, 但不得超过6小时,实验室接到送检样品后, 应将样品立即放入冰箱, 并在两小时内进行检验, 如果因路途遥远, 送检时间超过6小时, 应考虑采用延迟培养法。[2] 3.2 水样微生物的观察 仪器与材料 灭菌塑料瓶、光学显微镜、载玻片、盖玻片、水体样本 3.2.1用压滴法制作水体样本的标本片 取一片干净的载玻片放在实验台上，用滴管吸取样品于载玻片中央，用干净的盖玻片覆盖在液滴上（注意不要有气泡）即成标本片，用低倍镜和高倍镜观察，要充分利用显微镜的移片夹的移动，注意观察微生物组成。制作方法如下图2所示。[3] 图2 3.2.2用光学显微镜观察记录微生物形状及其活动方式，从而判断微生物种类； 3.2.3水样微生物总数的测定 3.3.2.1 细胞计数 （1）稀释：将样品稀释至合适的浓度。 （2）加被测样品至血球计数板：取已洗净的血球计数板，将盖玻片盖住中央的计数室，用细口滴管吸取少量已经充分摇匀的菌液于盖玻片的边缘，菌液则自行渗入计数室，静止5—10min，待菌体自然沉降并稳定后即可计数。 （3）计数：先用低倍镜寻找大方网格的位置，找到计数室后将其移至视野的中央，再换高倍镜观察和计数。需不断地上、下旋动细调节轮，以便看到计数室内不同深度的菌体。 3.3.2.2 计算方法 结果计算：先求得每中格菌数的平均值，乘以中格数，即为一大格中的总菌数，再乘以104，则为每毫升稀释液的总菌数，再乘以稀释倍数即为原液的总菌数[4]。两种不同规格的血球计数板的计算方法如下： （1）16×25的计数板计算公式： 细胞数（mL）＝（100小格内的细胞数/100）×400×10000×稀释倍数 （2）25×16的计数板计算公式： 细胞数（mL）＝（80小格内的细胞数/80）×400×10000×稀释倍数 3.3 制备培养基 仪器与材料 高压蒸汽灭菌器、培养皿、试管、烧杯、量筒、药物天平、玻璃棒、石棉网、药匙、pH试纸、酒精灯、锥形瓶、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH、琼脂、 3.3.1玻璃仪器准备：洗涤→包装→高压蒸汽灭菌→分装→冷冻保存 3.3.2培养基的配制： ①成分：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂15-20g，淀粉2g，蒸馏水1000ml。 ②方法：取牛肉膏0.5g，加水100ml，再加入蛋白胨、氯化钠、加热使之完全溶 解，调整pH值至7.2～7.4，分装，高压灭菌后备用。 向灭菌后冷却至5