新生大鼠肺成纤维细胞的原代培养改良法及细胞鉴定-生物资源.PDF

氨基酸和生物资源 2014，36（1）：0~0 Amino Acids Biotic Resources 新生大鼠肺成纤维细胞的原代培养改良法及细胞鉴定 * 连 敏，叶燕青，汪 甜，刘 冰 （武汉大学中南医院 呼吸内科，湖北武汉430071 ） 摘要：探讨新生大鼠肺成纤维细胞原代培养的改良方法及细胞鉴定。用胰酶消化组织块结合的方法提取新生大鼠肺 成纤维细胞，并纯化细胞，对肺成纤维细胞进行形态学观察，用HE 染色及免疫组化染色法对细胞进行鉴定，并用MTT 法测 定细胞生长曲线。倒置相差显微镜下观察选用改良法获得的细胞，3 d 后可见组织块周边有少许细胞，5 d 后组织块周围有 大量细胞爬出，生长迅速，10 d 接近融合。经改良后的方法纯化细胞，细胞活性状态较好的为3~5 代，5 代以后的细胞增殖 能力下降。对第3 代肺成纤维细胞进行HE 染色，镜下可见形态典型的成纤维细胞，免疫组化结果显示波形蛋白（Vi- men- tin ）阳性表达，细胞角蛋白（cytokeratin ）阴性表达。MTT 法检测第3 代细胞于3~5 d 处于对数生长期。胰酶消化组织块结合 法是一种可靠快速的肺成纤维细胞分离纯化的培养方法，使用这种方法可得到具有典型形态特征且活性较好的肺成纤维 细胞，初学者容易掌握。 关键词：肺成纤维细胞; 原代培养; 改良培养法;细胞鉴定 中图分类号：R 329.1 ；R 322.3+5 文献标识码：A 文章编号： ImprovedSeparationMethodandIdentificationofPrimary FibroblastsfromNewBornSpragueDawleyRats LIANMin，YEYanqing*，WANGTian，LIUBing （Department of Respiratory Medicine ，Zhongnan Hospital of Wuhan University ，Wuhan 430071 ，Hubei ，China ） Abstract：To study the improved separation method and identification of primary fibroblasts from new born Sprague Dawley Rats. We used the method of trypsin digestion ，tissue adherent and the improved separation methods to separate lung fibroblasts from new born Sprague Dawley Rats. Then ，the primary fibroblasts were purified by two different methods and observed with in- verted phase contrast-microscope. At the same time ，hematoxylin eosin staining and vimentin immunoh-istochemical staining were conducted to identify fibroblasts. Cells growth curve was evaluated using a color-metric assay with 3-[4 ，5-dimethylthiazol-2-yl]-2 ， 5-diphenyltenyletrazolium bromide （MTT ）. After 3 days ，we could observe the fibroblasts growing out of the tissue and growing rapidly in the fifth day and were grown to confluence in the tenth day using the impro