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癌胚抗原(CEA)诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 文件编号 编写者 审核者 批准者 医院 医院： 科： 室： 癌胚抗原诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共3 页 第 1 页 1.原理 试剂盒采用双抗体夹心一步法：抗CEA单抗包被于96孔荧免板；依次加入标准品/样本、铕离子(Eu3+)标记的抗CEA单抗，标准或样品中的CEA与包被单抗及Eu3+标记单抗于微孔内发生免疫反应，在微孔表面形成夹心免疫复合物（包被单抗—CEA—Eu3+标记单抗）。洗涤去除游离的Eu3+标记单抗，加入荧光增强液，微孔表面免疫复合物上的Eu3+被荧光增强液解离，并形成稳定的荧光配合物，荧光强度与标准或样品中的CEA浓度呈正比例，通过标准曲线可得出样品中CEA浓度。 2.样本处理 使用血清或以肝素作抗凝剂的血浆。2～80C条件下样本可保存2天，–200C可保存更长时间。样本避免反复冻融。 若样本中CEA含量大于500 ng/ml，请用生理盐水稀释后再测量。 3.试剂 本科室使用苏州新波生物技术有限公司癌胚抗原（CEA）时间分辨免疫荧光法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下： 癌胚抗原参考标准品：1套，6瓶，1ml/瓶 A：0ng/ml； B：2.5ng/ml； C：5 ng/ml；D：16 ng/ml；E：107 ng/ml；F：530 ng/ml 铕标记物：1瓶，1ml 实验缓冲液：1瓶，30ml 浓缩洗液：1瓶（40ml，使用前用去离子水作1：25倍稀释） 荧光增强液：1瓶，30ml 微孔反应板：1块（12×8） 吸头：20支 说明书：1份 医院： 科： 室 癌胚抗原诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共 3 页 第 2 页 4.仪器（用户自备） 时间分辨荧光分析仪； 微孔洗涤机； 微孔振荡器； 5.操作步骤 5.1 试剂的准备 ⑴洗涤液：将40ml浓缩洗液和960ml去离子水在干净的洗液瓶中混合，作为工作洗涤液备用。 ⑵铕标记：使用前一小时内，用实验缓冲液按1：50稀释铕标记（详见操作流程图）。 5.2 将实验缓冲液、标准品、待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温（20～250C）。 5.3 吸取25μl的标准品和样品，按顺序加入相应微孔。 5.4 在各微孔内加入200μl已稀释的铕标记溶液，在室温下慢速振动120分钟。 5.5 洗板6次，将板条在洁净的吸水纸上拍干。 5.6 在每个微孔内加入200μl的增强液，慢速孵育5分钟。 5.7 确定微孔反应条已固定在时间分辨荧光测定仪上，开始检测。 6.结果判断： 6．1结果测定 用本公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪或WALLAC公司时间分辨荧光测定仪（1230、1234、1420）测量时，检查程序的参数是否如下所示。如不符，请修改。 ASSAY TYPE（分析类型）：IFMA（时间分辨免疫荧光分析法） FITTING METHOD（曲线拟和方式）：PLINE SMOOTHED（平滑样条函数） X-AXIS（X轴）：LOG Y-AXIS（Y轴）：LOG-B BLANKS（背景孔数）：2 STANDARDS（参考标准点）：5 STANDARDS REPLICATES（参考标准点复孔数）：2 STANDARD CONC（参考标准点浓度）：2.5 STANDARD CONC（参考标准点浓度）：5 STANDARD CONC（参考标准点浓度）：16 STANDARD CONC（参考标准点浓度）：107 STANDARD CONC（参考标准点浓度）：530 UNKNOWN REPLICATES（待测样品孔数）：1 6.2结果判读：用本试剂盒对135份正常人血清进行检测，癌胚抗原测量值范围为0.3-5.5ng/ml。建议各实验室建立自己的正常值范围。 7．临床意义 CEA是一种分子量为180～200kD的糖蛋白，主要存在于消化道上皮组织、胰腺和肝脏，胎儿和成人消化道也产生少量CEA，但分泌到胃肠道而排出体外，而癌细胞分泌的CEA则进入淋巴液和血液。另外，CEA也见于羊水和胆道、肺、乳腺等组织。CEA检测的临床意义主要在于： 恶性肿瘤的辅助诊断。不少恶性肿瘤，特别是胃肠道恶性肿瘤、肺癌、乳腺癌患者，其血清CEA浓度常见明显升高。 病情预后和判断。肿瘤患者血清CEA含量增高程度常与肿瘤转移有一定关系，如：肺癌伴有肝转移时其中约85%可见CEA升高。 疗效评估和预报复发。肿瘤患者经手术切除、抗癌药物治疗或放疗后病情好转时，血清CEA浓度一般逐渐降低；当治疗效果不佳时，CEA浓度不下降或升高。 对肿瘤分期和病变程度的判断。如：血清CEA阳性与乳腺癌分期