分离培养原代树鼩角膜基质细胞-中国动物信息网.PDF

2019年5月 中国比较医学杂志 May,2019 第29卷　 第5期 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE Vol. 29　 No. 5 - 张璐,李妍,孙子雯,等. 分离培养原代树鼩角膜基质细胞 [J]. 中国比较医学杂志,2019,29(5):109 115. Zhang L,Li Y,Sun ZW,et al. Isolation and culture of tree shrew primary corneal stromal cells [J]. Chin J Comp Med,2019,29 - (5):109 115. - doi:10.3969/ j.issn.1671 7856. 2019.05.017 分离培养原代树鼩角膜基质细胞 张　 璐,李　 妍,孙子雯,李楠钰,胡竹林∗ (昆明医科大学第四附属医院眼科,云南省第二人民医院眼科,云南省眼科研究所, 云南省眼科疾病研究重点实验室,昆明650021) 　 　 【摘要】　 目的　 探索一种简单、易行的体外快速、分离培养树鼩角膜基质细胞(corneal stromal cells,CSCs)的 方法。 方法　 实验分为实验组A和实验组B,取树鼩角膜基质层,实验组A剪碎,用1% 的Ⅱ型胶原酶消化60min, 离心后重悬接种;实验组B用Ⅱ型胶原酶联合中性蛋白酶消化。 比较记录原代及传代细胞生长情况、传代时间,细 胞行波形蛋白免疫组化及免疫荧光鉴定。 结果　 胶原酶消化法可成功的获取原代细胞,9 d后即可进行传代,细 胞形态好;传代细胞生长较快,2~3 d 即可传一代;双酶消化法获得的CSCs较少,10 d才可见少量散落细胞,15~ 20 d可传代;波形蛋白免疫组化及免疫荧光表达阳性。 结论　 两种方法均可成功培养出CSCs,但胶原酶消化法能 更容易高效分离培养出大量树鼩CSCs。 【关键词】　 角膜基质细胞;体外培养;树鼩;组织工程 【中图分类号】 R-33　 　 【文献标识码】 A　 　 【文章编号】1671-7856(2019)05-0109-07 Isolation and culture of tree shrew primary corneal stromal cells ZHANG Lu,LI Yan,SUN Ziwen,LI Nanyu,HU Zhulin∗ (Department of Ophthalmology,the Fourth Affiliated Hospital of Kunming Medical University;Department of Ophthalmology, Yunnan Second People’s Hospital;Yunnan Ophthalmology Research Institute;Yunnan Key Laboratory of Ophthalmological Research,Kunming 650021,China) 　 　 【Abstract】　 Objective　 To explore a simple and easy methodfor the rapid isdation and culture of corneal stromal cells (CSCs). Methods　 Two experimental groups A and Bwere designated. The