带DNA酶柱上消化-聚合美.doc

北京聚合美生物科技有限公司 Mei5 Biotechnology, Co., Ltd 北京市海淀区学院路甲5号768创意园B-1211 热线电话： （86）010M5 Quickspin 通用植物RNA快速提取试剂盒 （带DNA酶柱上消化）使用说明书 产品名称 单位 货号 M5 Quickspin 通用植物RNA快速提取试剂盒（带DNA酶柱上消化） 50T MF610-05 【储存条件】 室温（按照各成份指示储存） 【产品简介】 独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，DNase直接在柱上消化残留DNA，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H2O将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 【产品特点】 1. 完全不使用有毒的β-巯基乙醇/苯酚/氯仿，也不需要乙醇沉淀等步骤。 2. 简捷，单个样品操作一般可在40分钟内完成。 3. 配套DNase I 柱上消化，得到的RNA不残留DNase消化，可直接用于反转录 荧光定量PCR、二代测序、芯片、RACE等实验。 4. 可以提取包括水稻、玉米、小麦、拟南芥、番茄、烟草和一般多糖多酚如棉花、冬青等植物。 5. 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达2.0～2.2，无DNA残留，可直接用于荧光定量PCR、RT-PCR、芯片、二代测序、Northern-blot等各种实验。 【产品组分】 试剂盒组成 保存 50次 裂解液RPA 室温 50 ml 去蛋白液RW1 室温 40 ml 漂洗液RW 室温 10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温 10 ml DNase Buffer -20 1.25 ml x 2 RNase free DNase I -20 0.25 ml RNase-free 吸附柱RA和收集管 室温 50套 本试剂盒按照各成份指示储存12个月不影响使用效果。 注意：DNase Buffer含Mn2+，可能有轻度发黄发黑，甚至黑色沉淀为正常现象，颠倒混匀后正常使用即可。 【注意事项】 1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机。 2. 需要自备乙醇，研钵(可选)。 3. 裂解液RPA和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 【操作流程】 提示： 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇! 直接研磨法（推荐）: a. 新鲜植物组织称重后取100-200mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100-200mg放入研钵）， 加入1 ml 裂解液RPA室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RPA立刻充分接触以抑制RNA酶活性。 b. 将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15秒，13,000rpm离心5-10分钟，沉淀不能裂解的碎片。 c. 取480μl裂解物上清（在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。 d. 立刻接操作步骤的步骤3。 液氮研磨法: a. 取500μl裂解液RPA，转入1.5ml离心管中。 b. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取50-100mg细粉转入上述装有RPA的离心管, 立即用手剧烈振荡20秒，充分裂解。 c. 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量。 d. 将裂解物13,000 rpm离心5-10分钟，沉淀不能裂解的碎片。 e. 取裂解物上清（在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。 f. 立刻接操作步骤的步骤3。 注意：以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理，可以提高产量。也就是使用1ml的裂解液RPA和100-200mg的样品。 将混合物(每次小于720μl，