基于入血成分金铁锁药材质量标准探究.docxVIP

基于入血成分金铁锁药材质量标准探究 ［摘要］采用高效液相色谱法建立了金铁锁药材 中尿囊素的含量测定方法。金铁锁药材经乙醇提取后，取续 滤液进行分析。采用ZORBAX NH2色谱柱(4.6 mm X 150 mm, 5 um),检测波长220 nm,柱温40 °C,流动相为乙睛-水 (93 : 7),流速1.0 mL?min-1。结果表明，尿囊素线性关 系良好，具有较好的精密度和重复性。在0.010 4?0.166 g?L-1,尿囊素的线性相关系数R2=0. 999 4(n=5)； RSD(n=6) 小于2. 1%；平均回收率为95. 47%?100. 9%o该方法具有良 好的灵敏度、回收率和重复性，可为金铁锁药材的质量控制 提供参考。 ［关键词］金铁锁；入血活性成分；尿囊素；高效液相 色谱 中药是一个复杂的化学体系，它对人体的作用通常也被 认为是多成分和多靶点综合效应的结果，因此中药材的质量 标准的制定与西药有着跟本的区别。目前，从化学物质基础 的角度来制定中药材的质量标准方法主要有色谱法、光谱法 以及质谱法等。然而不管选取哪种方法作为中药材的质量控 制方法，都必须先选择好合适的对照品。通常对照品的选择 大部分都是药材中含量相对较大的特征化合物或者是有效 成分。前者虽然是中药材中所含有的主要化合物，但是并不 一定是中药材发挥药效作用的化合物，因此选择这样的化合 物作为指标性化合物制定的中药材质量标准不能从根本上 控制中药材的质量。后者是中药材中具有一定生物活性的化 合物，用它来制定中药村的质量标准有一定的理论意义和实 践意义。传统中药多为口服给药，其有效物质必须以血液为 介质输送到靶点，从而产生作用，因而给药后的血清才是真 正起作用的“制剂”，血清中含有的成分才是中药的体内直 接作用物质，入血后的活性成分才是真正的有效成分[1-2] o 金铁锁Psammos订ene tunicoides为石竹科金铁锁属植 物的干燥根，主要分布在贵州、云南、四川、西藏等中国西 南地区，是我国西南地区特有的单属种植物，也是贵州民间 常用药物，现已作为稀有濒危物种列于《中国植物红皮书》 中，属国家二级保护植物。金铁锁以根入药，具有散瘀定痛、 止血、消痈排脓之功，用于跌打损伤、风湿痛、胃气痛、创 伤出血等的治疗[3-5] o 金铁锁被收录于《中国药典》2010年版中，但在该标准 中没有用其化学成分为指标的质量标准项。本研究以金铁锁 中的入血化学成分（尿囊素）为指标，建立了金铁锁药材中 尿囊素HPLC含量测定方法，该方法的精密度高，重复性好, 稳定性好，回收率高，测定结果准确，可为控制金铁锁药材 的质量提供科学依据，同时为以化学成分为指标的中药材质 量标准的制定提供参考。 1材料 髙效液相色谱仪Ultimate300高效液相色谱仪（包括四 元泵，在线脱气机，自动进样器，二极管阵列检测器，柱温 箱），1/10万电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）, KQ5200E型超声波清洗（昆明市超声仪器有限公司）。 色谱乙睛；水（重蒸水，临用前制备）；无水乙醇；尿 囊素对照品（中国食品药品检定研究院, 囊素对照品 （中国食品药品检定研究院, 1501-200001）； 铁锁药材经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为金铁锁P. tunicoides （6个不同产地）。 2方法与结果 2. 1样品前处理 2.1.1血浆样品前处理 取干燥、粉碎后的金铁锁药材 2.0 g,用30 mL 20%乙醇进行超声提取2次，合并提取液， 减压浓缩回收溶剂后得金铁锁提取物。取适量金铁锁提取物 用水溶解，配成浓度为20 g ? L-1的溶液，通过灌胃给药方 式给大鼠（210 g）金铁锁提取物水溶液3 mL,分别在10, 30, 60, 120 min后对大鼠进行采血，将血液离心后取上层 血浆100 UL用乙睛沉淀蛋白，涡旋混匀后离心，将上层清 液于氮吹仪上吹干，取93%乙M 100 uL进行溶解，离心后 待测。空白血浆按同样方法处理。 2. 1.2药材前处理 取金铁锁药材2.0g,精密称定，置 具塞锥形瓶或三角瓶中，加入20%乙醇30 mL,称定质量， 超声提取40 min,补重后取续滤液进行测定。 2.2标准溶液的配制 精密称取适量尿囊素对照品1.66 mg,加20%乙醇制成 每1 mL含0. 166 mg的标准储备液，根据需要用20%乙醇稀 释成不同质量浓度的标准工作液，即用即配。 2.3高效液相色谱条件 ZORBAX NH2 色谱柱(4.6 mm X 150 mm, 5 um)；流动 相为乙騰-水(93 : 7)；流速1. 0 mL ? min-1；检测波长220 nm；柱温40 °C；进样量5 uLo 2.4入血实验结果 将处理好的血浆样品经高效液相色谱仪测定，通过尿囊 素对照