第六章重组基因导入受体细胞.pptVIP

（4）显色互补筛选法 lacZ 基因上缺失操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶阴性突变体之间实现互补，这种互补现象称为α-互补。 具有完整乳糖操纵子的菌体能转译β-半乳糖苷酶(Z)、IPTG和X-gal时，产生蓝色沉淀物，使菌落成为蓝色。如果在载体DNA上插入β-半乳糖苷酶基因（lacZ)部分缺失的片段(lacZ’)，则重组DNA分子转化lacZ’互补型菌落，会在含有X-gal和IPTG的培养基中得到的转化子是蓝色菌落。 lac Z’是β-半乳糖苷酶基因部分缺失的DNA片段，含lac Z’的重组载体转化lac Z’互补型菌株，可转译β-半乳糖苷酶，在含有X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）和IPTG（异丙基-β-硫代半乳糖苷）的培养基上使转化子成为蓝色菌落，而lac Z’互补型菌株本身为白色菌落。当lac Z’区插入外源基因后，再转化lac Z’互补型菌株，由于不能翻译β-半乳糖苷酶，转化子即使在含有X－gal和IPTG的培养基上也只能长成白色菌落。这样可以区分含外源基因和不含外源基因的转化子。 此方法主要用于原核生物。 以显色剂X-gal作为选择物时，DNA对照组不应出现任何菌落，感受态细胞对照组长出的菌落应全是蓝色的，感受态细胞有效性对照组长出的菌落中应有白色的，其中一项不符，就有可能挑出假的转化子菌落。 （二）利用报告基因筛选植