高氯酸水解—蒽酮比色法测定淀粉.docVIP

高氯酸水解—蒽酮比色法测定淀粉含量 一 所用仪器： 10ml刻度试管、紫外可见分光光度计（PE Lambda 35）、电子天平（MEETTLER TOLEDO e=1mg,d=0.1mg）、胶头滴管、10 ml移液管、5ml移液管、50ml量筒、离心机（TABLE-TOP LOW-SPEED CENTRIFUGE Xiang Y; L-500）、100ml容量瓶、250ml容量瓶、数显恒温水浴锅（金坛市双捷实验仪器厂）、移液枪及对应枪头、旋窝振荡器、50ml离心管、慢速定量滤纸、锥形瓶、漏斗 二、试剂配置： 蒽酮-硫酸溶液：称取0.4g蒽酮溶于100ml 88%的硫酸溶液（现配现用） 淀粉标准液：称取200mg淀粉于250ml烧杯中，先加入5ml蒸馏水，再加入65ml 52%高氯酸，用玻璃棒搅拌至完全溶解，用玻璃棒引流至100ml容量瓶，用蒸馏水洗涤烧杯数次，洗涤液倒入100ml容量瓶，最后用蒸馏水定容。10 ml移液管取上述定容后溶液10ml于250 ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。 三、实验步骤： = 1 \* GB2 ⑴ 标准曲线的制定 用移液枪吸取淀粉标准溶液0.0ul（0.0ug）、125ul(10.0ug)、250ul(20.0ug)、500 ul(40.0ug)、750 ul(60.0ug)、1000 ul(80.0ug)分别装入已准备好的10ml刻度试管，每个体积两个重复，用蒸馏水调节各试管内溶液体积至2ml。把上述试管冷水浴2分钟，然后加入6ml蒽酮-硫酸溶液，旋窝振荡器上充分混匀，冷水浴2分钟，沸水浴5分钟，此时各试管中溶液呈蓝绿色，冷去至室温。同时，取2ml蒸馏水做空白对照。用紫外可见分光光度计，于640nm波长下进行吸光度测定，制备标准曲线。 浓度（ug/ml） 0.0 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 OD640 0.03 0.09 0.15 0.25 0.36 0.47 = 2 \* GB2 ⑵ 样品测定 用电子天平称取2.5g（准确至0.001g）待分析样品于50ml离心管中。 滴加2滴80%乙醇溶液润湿待测样品，加入5ml蒸馏水、25ml 80%乙醇溶液，置于涡旋振荡器混匀。 室温静置5分钟。以2500rpm离心5分钟，弃上清。 加入30ml 80%乙醇溶液，重复步骤2、3 。 于残留物中加入5ml蒸馏水、30ml 52%高氯酸溶液，置于涡旋振荡器涡旋10分钟，以2500rpm离心10分钟。 将上清转入100ml容量瓶。 于残留物中加入35ml 52%高氯酸溶液重复步骤5、6 。 以蒸馏水定容至100ml 。 将8中溶液进行过滤，弃去最初5ml滤液。用10ml移液管移取10.00ml滤液于250ml容量瓶，用蒸馏水定容。 取9中淀粉提取液2.00ml于10ml刻度试管，试管冷水浴2分钟，然后加入6ml蒽酮-硫酸溶液，旋窝振荡器上充分混匀。 冷水浴2分钟，沸水浴5分钟，此时各试管中溶液呈蓝绿色，冷去至室温。 用紫外可见分光光度计，于640nm波长下进行吸光度测定。