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高氯酸水解—蒽酮比色法测定淀粉.doc 2页

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高氯酸水解—蒽酮比色法测定淀粉含量 一 所用仪器: 10ml刻度试管、紫外可见分光光度计(PE Lambda 35)、电子天平(MEETTLER TOLEDO e=1mg,d=0.1mg)、胶头滴管、10 ml移液管、5ml移液管、50ml量筒、离心机(TABLE-TOP LOW-SPEED CENTRIFUGE Xiang Y; L-500)、100ml容量瓶、250ml容量瓶、数显恒温水浴锅(金坛市双捷实验仪器厂)、移液枪及对应枪头、旋窝振荡器、50ml离心管、慢速定量滤纸、锥形瓶、漏斗 二、试剂配置: 蒽酮-硫酸溶液:称取0.4g蒽酮溶于100ml 88%的硫酸溶液(现配现用) 淀粉标准液:称取200mg淀粉于250ml烧杯中,先加入5ml蒸馏水,再加入65ml 52%高氯酸,用玻璃棒搅拌至完全溶解,用玻璃棒引流至100ml容量瓶,用蒸馏水洗涤烧杯数次,洗涤液倒入100ml容量瓶,最后用蒸馏水定容。10 ml移液管取上述定容后溶液10ml于250 ml容量瓶,用蒸馏水定容至刻度。 三、实验步骤: = 1 \* GB2 ⑴ 标准曲线的制定 用移液枪吸取淀粉标准溶液0.0ul(0.0ug)、125ul(10.0ug)、250ul(20.0ug)、500 ul(40.0ug)、750 ul(60.0ug)、1000 ul(80.0ug)分别装入已准备好的10ml刻度试管,每个体积两个重复,用蒸馏水调节各试管内溶液体积至2ml。把上述试管冷水浴2分钟,然后加入6ml蒽酮-硫酸溶液,旋窝振荡器上充分混匀,冷水浴2分钟,沸水浴5分钟,此时各试管中溶液呈蓝绿色,冷去至室温。同时,取2ml蒸馏水做空白对照。用紫外可见分光光度计,于640nm波长下进行吸光度测定,制备标准曲线。 浓度(ug/ml) 0.0 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 OD640 0.03 0.09 0.15 0.25 0.36 0.47 = 2 \* GB2 ⑵ 样品测定 用电子天平称取2.5g(准确至0.001g)待分析样品于50ml离心管中。 滴加2滴80%乙醇溶液润湿待测样品,加入5ml蒸馏水、25ml 80%乙醇溶液,置于涡旋振荡器混匀。 室温静置5分钟。以2500rpm离心5分钟,弃上清。 加入30ml 80%乙醇溶液,重复步骤2、3 。 于残留物中加入5ml蒸馏水、30ml 52%高氯酸溶液,置于涡旋振荡器涡旋10分钟,以2500rpm离心10分钟。 将上清转入100ml容量瓶。 于残留物中加入35ml 52%高氯酸溶液重复步骤5、6 。 以蒸馏水定容至100ml 。 将8中溶液进行过滤,弃去最初5ml滤液。用10ml移液管移取10.00ml滤液于250ml容量瓶,用蒸馏水定容。 取9中淀粉提取液2.00ml于10ml刻度试管,试管冷水浴2分钟,然后加入6ml蒽酮-硫酸溶液,旋窝振荡器上充分混匀。 冷水浴2分钟,沸水浴5分钟,此时各试管中溶液呈蓝绿色,冷去至室温。 用紫外可见分光光度计,于640nm波长下进行吸光度测定。

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