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高氯酸水解—蒽酮比色法测定淀粉含量
一 所用仪器:
10ml刻度试管、紫外可见分光光度计(PE Lambda 35)、电子天平(MEETTLER TOLEDO e=1mg,d=0.1mg)、胶头滴管、10 ml移液管、5ml移液管、50ml量筒、离心机(TABLE-TOP LOW-SPEED CENTRIFUGE Xiang Y; L-500)、100ml容量瓶、250ml容量瓶、数显恒温水浴锅(金坛市双捷实验仪器厂)、移液枪及对应枪头、旋窝振荡器、50ml离心管、慢速定量滤纸、锥形瓶、漏斗
二、试剂配置:
蒽酮-硫酸溶液:称取0.4g蒽酮溶于100ml 88%的硫酸溶液(现配现用)
淀粉标准液:称取200mg淀粉于250ml烧杯中,先加入5ml蒸馏水,再加入65ml 52%高氯酸,用玻璃棒搅拌至完全溶解,用玻璃棒引流至100ml容量瓶,用蒸馏水洗涤烧杯数次,洗涤液倒入100ml容量瓶,最后用蒸馏水定容。10 ml移液管取上述定容后溶液10ml于250 ml容量瓶,用蒸馏水定容至刻度。
三、实验步骤:
= 1 \* GB2 ⑴ 标准曲线的制定
用移液枪吸取淀粉标准溶液0.0ul(0.0ug)、125ul(10.0ug)、250ul(20.0ug)、500 ul(40.0ug)、750 ul(60.0ug)、1000 ul(80.0ug)分别装入已准备好的10ml刻度试管,每个体积两个重复,用蒸馏水调节各试管内溶液体积至2ml。把上述试管冷水浴2分钟,然后加入6ml蒽酮-硫酸溶液,旋窝振荡器上充分混匀,冷水浴2分钟,沸水浴5分钟,此时各试管中溶液呈蓝绿色,冷去至室温。同时,取2ml蒸馏水做空白对照。用紫外可见分光光度计,于640nm波长下进行吸光度测定,制备标准曲线。
浓度(ug/ml)
0.0
5.0
10.0
20.0
30.0
40.0
OD640
0.03
0.09
0.15
0.25
0.36
0.47
= 2 \* GB2 ⑵ 样品测定
用电子天平称取2.5g(准确至0.001g)待分析样品于50ml离心管中。
滴加2滴80%乙醇溶液润湿待测样品,加入5ml蒸馏水、25ml 80%乙醇溶液,置于涡旋振荡器混匀。
室温静置5分钟。以2500rpm离心5分钟,弃上清。
加入30ml 80%乙醇溶液,重复步骤2、3 。
于残留物中加入5ml蒸馏水、30ml 52%高氯酸溶液,置于涡旋振荡器涡旋10分钟,以2500rpm离心10分钟。
将上清转入100ml容量瓶。
于残留物中加入35ml 52%高氯酸溶液重复步骤5、6 。
以蒸馏水定容至100ml 。
将8中溶液进行过滤,弃去最初5ml滤液。用10ml移液管移取10.00ml滤液于250ml容量瓶,用蒸馏水定容。
取9中淀粉提取液2.00ml于10ml刻度试管,试管冷水浴2分钟,然后加入6ml蒽酮-硫酸溶液,旋窝振荡器上充分混匀。
冷水浴2分钟,沸水浴5分钟,此时各试管中溶液呈蓝绿色,冷去至室温。
用紫外可见分光光度计,于640nm波长下进行吸光度测定。
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