雪龙黑牛性控冻精的生产及应用-中国畜牧业信息网.pdf

第二部分 品种选育及杂种优势利用 雪龙黑牛性控冻精的生产及应用 吴 蒙，史 明 （雪龙黑牛股份有限公司，辽宁大连 116031） 中图分类号：S823.2 文献标识码：A 1 目的及技术简介 被称为家畜繁育改良的第三次技术革命的XY 精子分离性控技术是当今全球最新最先进的动物生物 工程技术之一。该技术可以按照生产的需求人为的控制动物后代的性别，快速繁育高产家畜，加速家畜 的育种进程，提高畜牧业经济效益，促进畜牧业的发展。为了生产更多高品质的雪花牛肉，加快企业的 产业结构调整，雪龙黑牛股份有限公司将性别控制技术引入到冻精生产中，取得了良好的成效。本文对 雪龙黑牛性控冻精生产的流程及实践应用结果做出总结。 2 技术形成经过简介 2.1 性控技术原理 性别控制技术是一种通过对动物的正常生殖过程进行干预，使得雌性动物产出人们希望性别后代的 一门技术。利用动物X 精子的DNA 含量比Y 精子要高这一特点，通过流式细胞仪完成对X 、Y 精子的 分离。首先，应用特异性的荧光染料将精子染色，在流式细胞仪喷嘴产生高频率的震动作用下，高速喷 射的液流能形成包含单个精子的微小液滴；这些小液滴在激光照射后，会产生不同强度的荧光信号；探 测器将识别到的荧光信号传递给计算机系统，系统在识别X 、Y 精子之后，又将信息反馈到液流上，使 其带上不同的电荷；在电场力的作用下，精子分别向不同的方向偏转，落入收集器内，X 、Y 精子得以 分离。 2.2 性控技术流程 2.1 药品配制 药品（分离用鞘液及卵黄稀释液等）是冻精产品质量合格的基础。药品不达标会影响一批甚至多批 冻精产品，其容易出现的问题主要表现在pH 值的错误、药品成分残缺以及杂质过多这三个方面。因此， [1] 在药品配制过程中，按照顺序准确称量、无菌操作是所需遵循的基本原则 。此外，为了进一步提高药 品质量，所有分离及冻精的溶液（不含蛋黄）均进行pH 值调节及过滤处理。 精子稀释液中的蛋黄成分，能有效保护精子免受低温打击。然而，蛋黄中含有的一些大颗粒物质是 [2] 冷冻过程中的不利因素，容易形成不规则的冰晶，对精子造成损伤 。因此，在蛋黄稀释液沉淀过夜后， 通过特殊处理方法去除蛋黄液中的油脂及沉淀杂质，将蛋黄中的颗粒成分对精子的危害性降到最低。 2.2 鲜精处理 牛精液中病原微生物和非病原微生物种类繁多，细菌数超标的冻精不仅解冻活力低，还会引发疾病 [3] 的传播，危害很大 。为了从源头上控制细菌问题，采精所用的漏斗通过高压蒸汽灭菌20 min ，集精管 • 143 • 2014 中国牛业进展 160℃干热灭菌1 h。由于精子分离时所需的鲜精量较少，鲜精要经历6 h 甚至更长的时间的保存，很容 易引发细菌超标。对此，在精液采集后，向精液中添加适量的抗生素，能够有效抑制细菌的生长，再通 [4] 过过滤的方法除去鲜精中可能混有的石蜡或其它杂质，18℃恒温避光保存备用 。 2.3 染色 染色是精子分离的关键环节。根据测得的鲜精密度计算出染色所需的鲜精量，再将鲜精与加入 Hoechst33342 染料的稀释液混合，放入38℃水浴锅内预热45 min 。 2.4 机器分离流程 2.4.1 开机处理 开启真空泵、压缩机及ups 电源，确认供电正常后，打开电脑。开启激光电源，打开Summit 4.0 软 件。确认各个系统连接及运行正常。 2.4.2 图形调整 将tip 卸下，用超声波清洗，显微镜检查清理干净后，安装tip ；利用电子柜上面的显示器，调整水 柱保持垂直向下，流入废液收集器；把样品置于加样槽中，打开压力开关和样品开关，调整样品压