面条中还原糖的测定.pptxVIP

面条中还原糖的测定一、实验目的掌握还原糖的测定原理学习用比色法测定还原糖的方法了解紫外可见分光光度计的使用方法?二、实验原理在氢氧化钠和丙三醇存在的条件下，还原糖能将3,5-二硝基水杨酸中的硝基还原为氨基，生成橘红色的化合物，其最大吸收波长为540nm，在一定的浓度范围内其吸光度与还原糖浓度成正比，符合朗博比尔定律定律，故可进行定量分析。三、仪器与试剂仪器：1000mL容量瓶、100mL容量瓶、十万分之一分析天平、电子天平、玻璃棒、具塞试管、比色管、水浴锅、紫外-可见分光光度计、石英吸收池、研钵、100mL烧杯、量筒试剂：面条、80%乙醇、氢氧化钠、丙三醇、3,5-二硝基水杨酸、葡糖糖、盐酸、蒸馏水四、操作步骤1.还原糖的溶解：称取20g样品，置于250mL容量瓶中，加入200mL水，在45摄氏度水浴中加热1h，并不时振摇，冷却后加水至刻度，混匀，静置，沉淀。吸取200mL上清液于另一250mL容量瓶中。四、操作步骤2. 3,5-二硝基水杨酸溶液的制备：称取6.5g 3,5-二硝基水杨酸溶于少量水中，移入1000mL容量瓶中加入2moL/L氢氧化钠溶液325mL，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000mL。四、操作步骤3. 10mg/mL葡萄糖标准溶液的制备：准确称取1.0000g在100干燥至恒重的无水葡萄糖，加水溶解后移入100mL容量瓶中，加入0.5mL盐酸（防止微生物的生长），用水稀释至100mL。四、操作步骤4. 葡萄糖标准系列溶液的制备：在5支10mL具塞试管中，分别加入10mg/mL葡萄糖标准溶液1、2、3、4、5mL，定容，得到一组浓度分别为1、2、3、4、5mg/mL的葡糖糖系列标准溶液。四、操作步骤5. 标准曲线的测定：取1、2、3、4、5、mg/mL，置于干燥的25mL比色管中，各加入3,5-二硝基水杨酸溶液2mL，置于沸水浴中2min,显色，然后以流动水迅速冷却，用水定容到25mL，摇匀，以蒸馏水为空白对照，在540nm处测定其吸光度，绘制标准曲线，计算回归方程。四、操作步骤6. 样液的测定：取样液1mL，分别置于干燥的25mL比色管中，3,5-二硝基水杨酸溶液2mL，置于沸水浴中2min，显色，然后以流动水迅速冷却，用水定容到25mL,摇匀，以蒸馏水作为空白对照，在540nm处测定其吸光度，算出吸光度平均值，代入回归方程，计算样品中还原糖的含量。五、注意事项在还原糖的溶解中，要控制好温度，防止面条中的淀粉在高温条件下糊化，水解，影响测定结果。紫外-可见分光光度计在试验之前打开，预热30分钟。六、结果计算还原糖质量分数= m还原糖（mg） X 100%V样液 V样液总1000 x m x