小发夹RNA抑制人上皮生长因子受体2基因表达-中华预防医学杂志.pdf

·714· ．论著 小发夹RNA抑制人上皮生长因子受体．2 基因表达细胞株的构建 傅娟 蒋义国 居颖沈月兰 陈学敏 【摘要】 目的在经反式二羟环氧苯并芘(BPDE)恶性转化人支气管上皮细胞基础上建立一种 载体介导的小发夹RNA(shRNA)抑制人上皮生长因子受体-2(HER2／neu)表达的稳定细胞株。方法 构建靶向干扰HER2／neushRNA逆转录病毒载体pSIREN—RetmQ—neu，经酶切及测序鉴定后，将重组 表达载体经脂质体介导入反式BPDE恶性转化细胞中，同时以阴性片段重组载体转染细胞(阴性对 照)和空白细胞(16HBE-T)做对照，经嘌呤霉素筛选阳性转染细胞株。半定量RT-PCR和Western blotting技术分别检测分析各组细胞中HER2／neu基因mRNA和蛋白表达差异。结果获得载体介 导靶向抑制反式BPDE恶性转化细胞中HEB2／neu基因表达的细胞株。pSIREN-RetroQ-neu阳性转染 细胞组分别比较阴性对照和空白细胞组HER2／neumRNA表达量均下降(平均灰度值分别为0．114± 0．003、0．186±0．001、0．182±0．015)，其差异有统计学意义(t值分别为39．154、7．564，P值均 0．05)，而阴性与空白对照组间相比差异无统计学意义(t=一0．409，P0．05)。pSIREN—RetroQ—neu 转染细胞组相比阴性对照和空白细胞组HER2／neu蛋白表达明显下降，其抑制率分别达40％和 39％。结论 成功构建pSIREN．RetroQ．neu重组质粒，并能有效抑制反式BPDE恶性转化细胞中 HER2／neu表达。 【关键词】7，8．二氢-7，8．二羟苯并(a)芘9，10-氧化物；细胞系，转化；基因，erbB-2；RNA干扰 small of Constructionofcelllineof RNA-mediatedinhibitionHER2／nell hairpin geneexpression FU of and Juan‘。JIANGn-guo，JUYing．SHENYue-fan，CHENXue—min’Del尬amemOccupational and EnvironmentalHealthandMOELabEnvironment Public Medwal Key of Health，Schoolof Health，Ton面i Scienceand College，HuazhongUniversityof Technology，Wuhan430030，China authors：JIANG corn；CHENXue-min，Email：cxm3636@ Corresponding Yi—guo，Ema／／：j／angy／guo@hotma／L yahoo．com．cn ToestablishthestableinhibitionofHER2／neu vector- 【Abstraet】objective expressionby mediatedsmall RNAin transformedhumanbronchial celllineinducedanti- hairpin malignant epithelial by r111e psI