PGRP-LB和PGRP-SB基因在橘小实蝇免疫与肠道微生物调控中的作用分析.pdfVIP

华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文 2．2病原菌液注射感染对橘小实蝇系统免疫的影响……………………………一46 2．3病原菌液喂食感染对橘小实蝇肠道免疫的影响……………………………．．47 2．4 2．6 3讨{仑……………………………………………………………………………………………………………一53 结论与展望………………………………………………………………………………55 附录……………………………………………………………………………………一67 致谢……………………………………………………………………………………一68 万方数据 PGRP—LB／SB基因在橘小实蝇免疫及肠道微生物调控中的作用研究 摘要 dorsalis 橘小实蝇Bactrocera fHendel)是一种重要的农业害虫，主要以幼虫潜食 为害。橘小实蝇的寄主十分广泛，可危害柑桔、瓜类等多种水果、蔬菜和花卉。肠 道微生物与昆虫本身密切相关，影响着宿主很多生理功能，如营养代谢、免疫等方 框序列，并通过注射和喂食大肠杆菌Escherichiacoli研究橘小实蝇上述基因对条件 小实蝇的免疫响应及肠道微生物群落的变化，阐述这些基因在橘小实蝇免疫和肠道 微生物稳态维持中的作用，以期为橘小实蝇的综合防治提供一种全新的防控思路和 作用靶标。 1PGRP-LB和PGRP—SB基因的克隆与表达模式 功克隆到橘小实蝇尸a己P一船基因ORF框的核苷酸序列，其长度为558bp。序列分 析表明两个基因均与地中海实蝇相应基因序列的同源性最高，分别为86％和91％。 表达模式结果表明PGRP-LB基因在橘小实蝇成虫中肠中表达量最高，其次在成虫 脂肪体中表达量也较高，PGRP—SB基因主要在三龄幼虫和性成熟成虫脂肪体中表 达。 2PGRP-LB和PGRP—SB基因对条件致病菌感染的免疫响应 通过对橘小实蝇注射或喂食感染条件致病菌Ecoli后，Imd信号通路中的抗菌 肽基因Diptericin的表达量显著增加，注射E 表达量上调了6．40倍，喂食E 基因表达量上调2．97倍，注射菌液后24hPGRP—SB基因表达量上调1．61倍；喂食 菌液后12hPGRP—LB和PGRP—SB基因反应均最强烈，表达量分别比对照组上调了 54．32％和30．26％。但注射感染比喂食感染引起的体液免疫反应更为强烈迅速。这 万方数据 华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文 些结果表明Ecoli能启动橘小实蝇系统及肠道Imd信号通路的免疫反应，且抗菌肽 3PGRP-LB和PGRP-SB基因对橘小实蝇免疫反应的影响 通过干扰PGRP一￡曰和PGRP—SB基因后注射或喂食Ecoli研究PGRP-LB和 照组相比均显著上调，免疫反应增强且免疫反应持续时问增长。以上结果说明 疫负调控作用。 4PGRP-LB和PG尺P一船基因沉默对橘小实蝇肠道微生物群落的影晌 小实蝇肠道内共生菌群落稳态维持中的作用。Real．timePCR结果表明，干扰后5 天内PGRP一三曰和PG艘一SB基因表达量都处于下调状态，第15天时基因表达量恢 复正常，与对照组表达量无显著差异。同时分别于第5、15、20天检测肠道微生 物群落变化，结果表明PGRP—LB基因干扰后第5天肠道内总细菌数量、Y一变形菌 第20天肠道内总的细菌和五个门的细菌数量均恢复到正常水平。PGRP—SB基因二F 万方数据 PGRP—LB／SB基因在橘小实蝇免疫及肠道微生物调控中的作用研究 ￡- 齐r162．06％，其他四个门的细菌数量没有显著变化。 这些结果表明P础P．LB和PGRP—SB基因的缺失确实能够引起橘小实蝇肠道 不可或缺的作用。 关键词：橘小实蝇；昆虫免疫；肽聚糖识别蛋白；肠道微生物群落 万方数据 华中农业大学2015屑硕士研究生学位(毕