应用核糖体展示技术高效筛选人源抗IgE单链抗体-药学学报.pdf

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 12, 47 ( 10): 1329 1335 ·1329 · 用核糖体展示技术高效筛选人源抗IgE 单链抗体 1 1 2 1 1 1 1 1* 张勇侠 , 王保成 , 余 馨 , 代云见 , 何勇智 , 丛 聪 , 夏 永 , 王明蓉 ( 1. 成都生物制品研究所有限责任公司, 四川 成都 610023; 2. 中山大学 学院, 广东 广州 510006) 摘要: 本研究从哮喘患者外周血分离淋巴细胞、提取总mRNA, 采用RT-PCR 技术分别构建重链可变区VH (variable region of heavy chain) 和轻链可变区 VL (variable region of light chain) cDNA 库, 然后通过连接肽 (Gly Ser) 和特定引物将VH 和VL cDNA 基因组装成人源单链抗体 (scFv) 核糖体展示模板基因库。应用兔网织 4 3 红细胞核糖体展示技术, 单引物原位 转录技术, 经3 轮展示富集并回收针对人源IgE 蛋白 (免疫球蛋白E) 的 目的单链抗体基因; 回收的抗体基因经双酶切后与pET22b (+) 载体连接, 转化至E. coli Rosseta (DE3) 宿主细 胞, 应用菌落PCR 结合Dot blotting 技术快速鉴定阳性克隆, 抗原ELISA 法进一步鉴定阳性克隆。VH 和VL 基 因库得到正确的构建, 长度分别为400 和7 10 bp, 库容为1013 。核糖体展示模板构建正确, 长度为 1 100 bp 。该 基因库经过3 轮针对IgE 蛋白的核糖体展示, 目的基因得到了有效富集和回收。经过高效克隆、表达和鉴定, 确 定 1 株针对人IgE 蛋白显示最强亲和力的阳性克隆菌pET-IgE-6 。经测序和序列分析证实该单链抗体为人源抗体, 序列未见国内外报道。结果表明, 采用患者外周血构建人源抗体基因库, 结合核糖体展示技术, 可以成功获得高 亲和力的人源单链抗体分子。该技术路线为快速获得具有药用价值的人源抗体提供了参考。 关键词: 免疫球蛋白E; 人源抗体; 核糖体展示技术; 过敏性疾病 中图分类号: R963 文献标识码: A 文章编号: 05 13-4870 (20 12) 10- 1329-07 Ribosome display screening of a novel human anti-IgE scFv fragment 1 1 2 1 1 ZHANG Yong-xia , WANG Bao-cheng , YU Xin , DAI Yun-j ian , HE Yong-zhi ,