RPS14基因重组慢病毒载体的构建及其在MUTZ-8细胞中的表达.docVIP

RPS14基因重组慢病毒载体的构建及其在MUTZ-8细胞中的表达 罗 静，蒋 文，刘 林，王 利 （400016重庆，重庆医科大学附属第一医院血液科） [摘要] 目的 构建携带人RPS14基因重组慢病毒载体获得稳定产毒的细胞，并观察其在人MDS细胞株MUTZ-8细胞中的表达。方法 通过逆转录方法，获得目的基因RPS14；将目的基因克隆入慢病毒表达质粒pGC-FU Vector，构建含有RPS14基因的重组慢病毒载体pGC-FU RPS14，经PCR、酶切及测序鉴定其正确性；在Lipofectamine 2000介导下，将成功构建的质粒pGC-FU RPS14与慢病毒包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞，通过实时定量PCR法测定病毒滴度，并将获得的重组慢病毒载体pGC-FU RPS14转染人MDS细胞株MUTZ-8，用流式细胞仪检测转染效率，RT-PCR检测靶细胞内RPS14mRNA的表达。结果 含有RPS14基因的重组慢病毒载体经PCR、酶切和测序鉴定构建正确,且测定的病毒滴度为2.0×109TU/ml。流式细胞仪检测其转染效率为68.41%，RT-PCR检测到转染后RPS14 mRNA在靶细胞中的稳定表达。结论 构建了携带人RPS14 基因的慢病毒载体，转染人MUTZ-8细胞株后能够稳定表达RPS14基因。 [关键词]