基因工程的基本操作程序.docxVIP

1. 2基因工程的基本操作程序一问题导读 使用时间：02月21 tl-02月27日 ?学习目标 1、 简述基因工程原理及基本操作程序。 2、 尝试设计某一转基因生物的研制过程。 ?学习重难点： 学习重点：基因工程基本操作程序的四个步骤。 学习难点：（1）从基因文库中获取目的基因。（2）利用PCR技术扩增目的基因。 ?知识链接 叙述DNA重组技术操作的三种工具的作用？ 作为载体应该具备哪些条件？最常用的运载体是什么？ 自主学习（理知识，固基础） 自主学习（理知识，固基础） 惧蜩酗 飞！i錨加 ==== 0 o oo 0 0 基因工程的基本操作程序主要包括四个步 骤： 学点一、目的基因的获取: 目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的 。也可以是一些具有 的 因子。 2.获取目的基因的方法 （1）从基因文库中获取冃的基因 基因文库：将含有某种生物不同基因的许 多 ,导入受体菌的群体中储 直，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为 基因文库。 种类 基因组文库：含有一种生物的 基因。 部分基因文库：含有一种生物的 基因，如cDNA文库。 目的基因的获取依据： 根据基因的有关信息：基因的 序列、基因在 上的位置、 基因的 产物niRNA、基因的翻译产物蛋白质等特性获取目的基因。 (2)利用PCR技术扩增目的基因。 PCR含义：是一项在生物体外 特定DNA片段的核酸合成技术。 PCR原理：DNA o 条件：有一段已知目的基因的 序列，以便根据这一序列合 成 o 过程：目的基因DM受热形成 ,与 结合，然后 在 的作用下进行延伸形成DNAo 方式：每次循环后目的基因的量增加一倍，即成 扩增二”(n为扩增循环的 次数)o (3)人工合成法：如果 , 已知，可以通 —用化 学方法 人工合 成。过 —用化 学方法 人工合 成。 学点二基因表达载体的构建一基因工程的核心 斌园丧达戟体根式圏 的部位，驱动基因转录产生mRNA ,最终获得所需 TOC \o 1-5 \h \z 的 。 3 .终止子：也是一段有特殊结构的 ,位于基因 的 ,终止 O 标记基因：鉴别受体细胞是否含有目的基因,从而将 筛 选出来。常用的标记基因是 O 表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中 ,并且 给 下一代；同时使目的基因能够 和 作用。 不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所 差别。 学点三、将目的基因导入受体细胞 (一)转化的概念：目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞 内 和 过程。 (二)常用的转化方法： 将目的基因导入植物细胞 被源细 物外的染农杆菌转化法 被源细 物外的染 农杆菌特点：易感 染 植物和裸子植物，对— 植物没有感染力；Ti质粒 的 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。 转化过程：目的基因插人 农杆菌一导入植物细胞一目的基因整合 到植物细胞染色体上一目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。 基因枪法 基因枪法：是单子叶植物屮常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 (3)花粉管通道法 花粉管通道法：这是我国科学家独创的一种方法，是一种十分简便经济的方法(我的的转 基因抗虫棉就是用此种方法获得的)。植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。 花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA (含目的基因)，使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 将目的基因导入动物细胞 方法：显微注射技术。 操作程序：目的基因表达载体 -収卵(受精卵)一显微注射一注射 了目的基因的受精卵移植到 性动物的 内发育一新性状动物。 将目的基因导入微生物细胞 ⑴ 原 核 生 物 特 点： 、 多 为 、 相对较少等。 大肠杆菌最常用的转化方法是: 处理细胞一 细胞一表 达载体与感受态细胞混合一 细胞吸收D7A分子。 学点四、目的基因的检测与鉴定 1.检测 .首先要检测 ,方法是采 TOC \o 1-5 \h \z 用 。 其次还要检测 ,方法是釆 用 O 最后检测 ,方法是 从转基 因生物 中提取 , 用相应 的 进行 0 2 . 鉴定：进行 的鉴定。 如 O 1. 2基因工程的基本操作程序一课堂导学 基因工程的基本操作程序的四个主要步骤： 目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定 二、目的基因的获取 1目的基因的定义 1目的基因的定义 2获取目的基因的方法 练习1.以重组DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类生活，请回答下列问题。 （1） 获得目的基因的方法通常包 TOC \o 1-5 \h \z 括 、 和 O （2） 构建基因文库时需要对DM分子进行切割和连接所使用的酶分别 是 和 0 （3） PCR扩增目的基因的原