抗人CD154单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析-北京大学学报.pdf

中国病理生理杂志 　Chinese Journal of Pathophysiology 　2002 ,18 ( 11) : 1381 - 1385 ·1381 · ( ) [文章编号] 　1000 - 4718 2002 11 - 1381 - 05 抗人 CD154 单抗轻重链可变区基因 克隆与序列分析 1 2 3 1 1 张春艳 , 　张志方 , 　李树浓 , 　宁 　波 , 　陈琼玲 ( 中山大学中山医学院 1免疫学教研室 , 2 生理学教研室 , 3病理生理学教研室 ,广东 广州 510089) 　　[摘 　要] 　目的:克隆抗人 CD154 抗体轻重链可变区基因 ,并分析其核苷酸序列 ,为基因工程抗体的构建奠定 基础 。方法 :从分泌能抑制免疫反应的抗人 CD154 单克隆抗体杂交瘤细胞株 7E8 中提取总 RNA ,合成 cDNA 第一链 ( ) ( ) 后 ,经 PCR 扩增获得抗人 CD154 单抗轻链可变区 VL 和重链可变区 VH 基因 ,分别克隆入 pUC18 载体 ,并进行序列 κ 分析 。结果 : ①抗体的轻链可变区基因全长为 341 bp ,编码 113 个氨基酸 ,归属于 Ig 的V 2 基因 ,氨基酸序列分析结 果显示轻链可变区含有明确的4 个骨架区和 3 个抗原决定簇互补区 ,在第 23 位和第 93 位氨基酸为半胱氨酸 ,是与 抗体二硫键形成有关的两个特征性氨基酸 ; ②抗体的重链可变区基因全长为 354 bp ,编码 118 个氨基酸 ,归属于小鼠 IgVH 基因 ,D 、J 区基因分别属于 DSP2 . 9 和J H2 ,氨基酸序列分析结果显示 ,重链可变区含有明确的 4 个骨架区和 3 个抗原决定簇互补区 ,在第 23 和第 97 位氨基酸为半胱氨酸 ,是与抗体二硫键形成有关的两个特征性氨基酸 。结论 : 经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别为抗体的轻 、重链可变区基因。 [ 关键词] 　CD40 配体 ;可变区基因; 碱基序列分析 ;基因克隆 　　[ 中图分类号] 　R392 . 11 　　　　　[文献标识码] 　A 　　T 淋巴细胞在免疫应答的产生中起重要作用 , T 基因 ,并分析其核苷酸序列 ,为进一步研制基因工程 细胞的活化需两个信号的刺激 ,TCR - CD3 与抗原肽 抗体奠定基础 。 ( - 主要组织相容性复合体 major histocompatibility 材 　料 　和 　方 　法 ) complex ,MHC 分子结合传递第一活化信号 ,T 细胞表 达 CD154 ,CD154 与抗原呈递细胞的 CD40 结合 ,上调 1 　材料 APC 细胞表达 B7 ,B7 与 T 细胞膜上的 CD28 结合 ,传 杂交瘤细胞株 7E8 由本室制备 ; RPMI - 1640 细 递第二活化信号 ,使 T 细胞活化 。研究表明[ 1 ,2 ] ,采 胞培养基购 自 GIBCO 公司 ; RNA 提取试剂盒购 自 用抗人 CD154 单克隆抗体阻断第二活化信号 ,可以 QIA GEN 公司 ; Pwo DNA polymerase 、Reverse transcrip 诱导 T 细胞无反应性 ,达到抑制