试验目的试验原理仪器试剂试验步骤注意事项思考题RF.ppt

采用上行法时，流动相由于毛细管作用自下而上地移动，流动相上升时，与滤纸上的固定相相遇，这时试样中的各组分就在两相中不断进行分配。因为它们的分配比不同，分配比大的组分上升得快，分配比小的组分上升得慢，从而形成了距离原点不等的层析斑点，达到分离的目的。 * 采用上行法时，流动相由于毛细管作用自下而上地移动，流动相上升时，与滤纸上的固定相相遇，这时试样中的各组分就在两相中不断进行分配。因为它们的分配比不同，分配比大的组分上升得快，分配比小的组分上升得慢，从而形成了距离原点不等的层析斑点，达到分离的目的。 * 氨基酸被水化茚三酮氧化，分解出醛、氨、二氧化碳，而水化茚三酮本身则被还原为还原茚三酮。 * 还原茚三酮和NH3、茚三酮缩合成新的有色化合物而使斑点显色。 * 取纸条，在距离下端2.5 cm处，用铅笔画一水平线，在线上间距离2cm画出四个点（可标记为1，2，3，4），作为原点。用毛细管在前1，2，3号分别点上三种氨基酸标准溶液，4号点氨基酸混合试液，点出的扩散原点直径约2mm大小。 * 将点好样的滤纸晾干，然后用挂钩挂在层析筒盖上，放入已盛有80mL展开剂的层析筒中，滤纸下端浸入展开剂约0.5cm，但原点必须离开液面。记下开始层析时间。当展开剂前沿上升至15 cm左右时，取出层析纸，画出溶剂前沿，记下展开停止时间。将滤纸晾干或烘干。 * 展开后的滤纸晾干或烘干后，用喷雾器在层析纸上均匀喷上显色剂茚三酮，放人l00℃烘箱中烘3～5min，滤纸干后，即可显出紫红色的层析斑点，用铅笔描出各斑点的轮廓。 * 用尺量出各组分的a，b值。 * 无机纸色谱法 化工学院 实验教学中心 1、掌握纸色谱法分离物质的原理和操作技术； 2、学习如何根据不同组分的分离结果来鉴别未知试样的组分。 实验目的 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 定义： 纸色谱分离法又称纸层析法，是根据不同物质在两相中的分配比不同而进行分离的一种微量分离方法。 实验原理 载体——层析纸（滤纸）； 固定相——滤纸上的吸湿水分； 流动相——有机溶剂（展开剂）。 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验原理 分离示意图 A B 上行法 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验原理 原点 展开后斑点 溶剂前沿 a1 a2 b A B 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验原理 RF: 通常用比移值RF衡量各组分的分离程度： RF:0～1。 RF值相差越大，分离效果越好。 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 RF：物质定性分析的依据。 在进行分析工作时，可使用各组分相应的标准样品同时作对照实验。 影响因素：主要是展开剂、滤纸质量、温度等实验条件。 实验原理 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验原理 本实验分离和鉴定的氨基酸混合液：异亮氨酸、赖氨酸和谷氨酸。 氨基酸是无色的，在层析后需在纸上喷洒显色剂茚三酮，斑点呈现蓝紫色。 显色机理： （1） 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验原理 （2） 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验原理 （3） 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 主要仪器： （1）玻璃层析筒 150mm×300mm(φ×h)。 （2）层析纸条 100mm×240mm 。 （3）毛细管 直径1mm左右。 （4）喷雾器 仪器试剂 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 主要试剂： （1）展开剂 正丁醇:甲酸:水＝60:12:8。 （2）氨基酸标准溶液 2 g·L-1水溶液。 （3）茚三酮 1 g·L-1乙醇溶液。 （4）氨基酸混合试液 将（2）配制的三种氨基酸等量混合。 仪器试剂 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验步骤 实验目的 实验原理 仪器试剂 点样 展开分离 显色 计算比移值 实验步骤 注意事项 思考题 实验步骤——点 样 2.5cm 2.5cm 1 2 3 4 异亮氨酸 赖氨酸 谷氨酸 混合液 各点φ≈2mm 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验步骤——展开分离 展开剂 滤纸下端浸入展开剂约0.5cm，计时。 一段时间后，前沿上升15cm左右 记下展开停止时间 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 采用上行法时，流动相由于毛细管作用自下而上地移动，流动相上升时，与滤纸上的固定相相遇，这时试样中的各组分就在两