ANGPTL4基因表达和血管生成与胃癌发展的关系.docVIP

PAGE PAGE 1 ANGPTL4基因表达和血管生成与胃癌发展的关系 　　[摘要]目的探讨ANGPTL4mRNA的表达和血管生成与胃癌发展的关系。方法选择50例胃癌患者组织标本作为实验组，10例正常胃黏膜标本作为对照组，采用原位杂交技术检测ANGPTL4mRNA表达，免疫组化染色法检验微血管密度，并分析其与胃癌临床病理学特征的关系。结果ANGPTL4mRNA阳性率及微血管密度MVD计数均为胃癌组织癌旁组织正常胃黏膜，差异有统计学意义（P0.01）。经Pearson相关分析，ANGPTL4mRNA阳性率与MVD计数呈正相关（P0.05）。胃癌组织中ANGPTL4阳性表达率与MVD计数与年龄、性别无关，与组织病理分级、TNM分期、浸润深度及淋巴结转移密切相关（P0.05），分别与组织病理分级、TNM分期、浸润深度呈正相关（P0.05）。结论胃癌组织中ANGPTL4mRNA高表达可能促进新生血管形成，肿瘤细胞浸润和转移。 　　[关键词]ANGPTL4基因；胃癌；微血管密度；浸润；转移 　　[中图分类号]R735.2[文献标识码]A[文章编号]1674-4721（2013）03（b）-0013-04 　　胃癌是高发的消化道恶性肿瘤，并具有早期多发转移的生物学特性，肿瘤的进展与多种因素有关，由于高代谢状态促使其对血供需求剧增，而新生血管形成在肿瘤的生长、浸润、转移过程中起关键作用。血管生成素样蛋白4是一种新发现的血管生成相关因子，2002年被国际人类基因组织命名为ANGPTL4，其基因和蛋白具有与血管生成素相似的结构和功能[1]。近年来研究发现其广泛存在与内脏器官组织细胞中，与血管内皮细胞迁移、管状成形及血管重新分布有关[2-3]。本研究通过观察胃癌组织中ANGPTL4基因的表达及其与血管生成和肿瘤发展的关系，探讨其在胃癌发展中的作用，为临床早期预防提供参考。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 　　收集2011年2月～2012年2月本院行胃贲门癌手术治疗患者50例的病理组织标本为实验组，男28例，女22例，年龄33～75岁，平均（56.93±10.37）岁，术前均未经化疗、放疗或免疫治疗。病理检验证实均为腺癌，组织病理分级：低分化14例，中分化20例，高分化16例；临床分期按国际抗癌协会（UICC）TNM标准：Ⅰ期11例、Ⅱ期20例、Ⅲ期10例、Ⅳ期9例；淋巴结转移26例，无淋巴结转移24例；浸润浅肌层16例，浸润深肌层22例，浸润浆膜层12例。每例患者均选择肿瘤组织及手术切缘组织标本。另选择同期我院电子胃镜活检胃溃疡旁正常胃黏膜组织10例作为对照组，男6例，女4例，年龄35～72岁，平均（55.86±10.45）岁。 　　1.2试剂与仪器 　　人ANGPTL4单克隆抗体、鼠抗人CD34单克隆抗体、免疫组化试剂盒购自均购自北京中杉金桥生物技术有限公司；原位杂交预杂交液，NBT/BCIP，原位杂交5端生物素标记ANGPTL4mRNA探针购自上海瑞齐生物科技有限公司。美国雅培ThermoBriteS500型原位杂交仪，奥林巴斯FV1000激光共聚焦显微镜。 　　1.3研究方法 　　1.3.1原位杂交技术检测ANGPTL4mRNA 　　标本切片常规进行脱蜡、梯度酒精脱水、H2O2预孵、蛋白酶消化，滴加20μL预杂交液处理4h，加入含ANGPTL4基因荧光标记探针、探针缓冲液、超纯水配制的混合液10μL，置杂交仪中，于73℃变性5min，37℃杂交12h，洗脱液浸泡、洗涤，NBT/BCIP染色，避光显色2～3h[4]。以阳性结果胃癌组织作为阳性对照，不含探针标本为阴性对照。 　　1.3.2免疫组化染色法检测微血管密度（MVD） 　　标本切片脱蜡、H2O2预孵、漂洗、高温高压修复抗原，按照免疫组化试剂盒说明采用链霉素亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术（SABC）以CD34标记血管染色[5]。以试剂盒公司提供的阳性样本作为阳性对照，PBS替代一抗为阴性对照。 　　1.4结果判定 　　ANGPTL4mRNA阳性判定：激光共聚焦显微镜观察杂交信号并进行计数，细胞质ANGPTL4mRNA信号于细胞质内呈浅黄色至棕黄色颗粒阳性，随机选取5个细胞数200个的高倍视野，按染色强度及阳性细胞占比进行结果判定，染色强度由阴性～棕黄为0～3分；阳性细胞占比50%为3分；后将两者得分相乘计算总分，总分≥3为阳性，50μm及肌层较厚者不计为微血管，随机选取5个细胞数200个的高倍视野计数微血管数，5个区域微血管计数均值作为MVD值。 　　1.5统计学处理 　　采用SPSS17.0统计学软件进行分析，计数资料采用卡方检验，计量资料以均数±标准差表示，两独立样本比较采用t检验，多样本比较采用F检验，两两比较采用q检验，等级资料相关性采用Spearman等级