动物细胞培养和核移植技术-课件.pptVIP

4.体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什么问题？请你查阅资料，了解这方面的前沿动态。 研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研究中。 应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距离。 2.2 动物细胞工程 生产单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 是其他动物细胞工程技术的基础。 一.动物细胞培养 如何进行细胞培养? 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 (一)概念 阅读P44-P45页回答问题 问题1：试说动物细胞培养大致过程、原理 (二) 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的器官、组织 细胞悬液 10-50代细胞 剪碎 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 胰蛋白酶处理分瓶培养 原代培养 动物细胞培养不能最终培养成生物体 细胞增殖缓慢，核型可能变化 贴壁生长 接触抑制 10代以内，保持正常二倍体核型 传代培养 单个细胞 培养液 原理： 　有丝分裂 问题4：为什么用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理？ 问题2：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。 问题3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 分散成单个细胞、细胞群（团）后容易培养，细胞所需的营养容易供应，其代谢废物容易排出 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰 蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和 细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。 问题5：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？ 动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为2.胃蛋白酶在PH为7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。 问题6：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？ 控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程） ②传代培养 ①原代培养 定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 强调一：原代培养与传代培养 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养（一般） 传代培养 原代培养和传代培养、细胞株和细胞系（了解） ▲细胞株：传代细胞一般能传到40-50代，遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。 ▲细胞系：传代50代以后，部分细胞遗传物质发生了改变，能无限增殖，获得不死性，叫细胞系。 强调二：细胞贴壁过程 ■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 强调三：接触抑制 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ P46讨 论 充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。） 适宜温度、PH和气体环境；无菌无毒环境 (三) 动物细胞培养的条件P46 1、无菌、无毒环境（无菌处理和添加抗生素目的？更换培养液的好处？） 2、营养:与体内相同，液体合成培养基：糖、氨基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。 3、温度和PH 4、气体环境95%空气、5%CO2--维持培养液PH 适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃。 适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4 动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 P47最上面 1、大规模的生产生物制品。 2、培养的动物细胞作为基因工程的受体细胞。 3、检测判断物质的毒性。 4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于 等，为 及其他疾病提供理论依据。 (四) 动物细胞培养技术的应用 筛选抗癌药物 治疗和预防癌症 植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的全能性 细胞增殖 培养基性质 固体培养基 液体培养基 培