低温诱导黄花蒿中青蒿素的生物合成及其机制研究.pdfVIP

• 350 • 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 2 期 2012 年 2 月 低温诱导黄花蒿中青蒿素的生物合成及其机制研究 * 杨瑞仪 ，卢元媛，杨雪芹，冯丽玲，曾庆平 广州中医药大学热带医学研究所，广东 广州 510405 摘 要：目的 研究低温处理对黄花蒿中青蒿素及其他萜类合成通路的影响。方法 以 4 ℃为胁迫条件，利用高效液相色 谱法测定青蒿素量；硫酸钛沉淀法和 N, N-二甲基-对-亚硝基苯胺漂白反应分别检测黄花蒿叶片过氧化氢（H O ）和单线态 2 2 氧（1O ）量；紫外分光光度法检测过氧化氢酶（CAT ）活性；实时荧光定量PCR 技术定量分析青蒿素合成途径及竞争途径 2 关键酶基因的表达。结果 4 ℃处理4 h 后黄花蒿叶片中 1O 和 H O 量升高，并伴随着青蒿素量和 CAT 活性逐步提高，4 、 2 2 2 24 、48 h 后青蒿素量分别提高 20% 、65%、80%；4 ℃处理24 h 后，青蒿素合成相关基因（HMGR 、FPS 、ADS 、CYP71AV1、 CPR 和 DBR2 ）的表达普遍上调，其中ADS 基因的表达提高 16 倍；而青蒿素合成竞争途径酶（β-石竹烯合酶）基因（CS） 表达则下调近 20 倍。结论 低温刺激可能通过产生高浓度活性氧（ROS ）促进青蒿素合成前体转化，上调青蒿素合成相关 基因表达并抑制竞争途径基因表达等途径促进青蒿素合成。 关键词：黄花蒿；青蒿素；低温诱导；活性氧；基因表达 中图分类号：R282.1 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)02 - 0350 - 05 Biosynthesis of artemisinin in Artemisia annua induced by low temperature and its mechanism YANG Rui-yi, LU Yuan-yuan, YANG Xue-qin, FENG Li-ling, ZENG Qing-ping Tropical Medicine Institute, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, China Abstract: Objective To investigate the effects of low temperature on the biosynthesis of artemisinin and other terpenoids in Artemisia annua . Methods After 4 ℃ treatment, A. annua leaves were collected for artemisinin analysis by HPLC. Hydrogen peroxide (H 1 O ) and singlet oxygen ( O ) production were detected by Ti(SO ) precipitation and the means of bleaching of N, 2 2 2 4 2 N-dimethylnitrosoaniline. The catalase (CAT) activity was deter