口腔念珠菌的分离及鉴定.docVIP

PAGE PAGE 1 口腔念珠菌的分离及鉴定 　　念珠菌这个词起源于拉丁语“Candid”，意为白色的。念珠菌是具有二相性的真菌，孢子相是无致病性的，而当菌群失调或机体的抵抗力降低时，念珠菌就会产生具有侵入性以及致病力的假菌丝[1]。念珠菌作为内源性的共生菌，它的致病过程受很多因素影响，这不同于致病微生物以自身的毒力作为唯一的关键因素在致病过程中起作用。念珠菌是机会致病菌，因此无论是浅表真菌感染还是系统真菌感染都与机体生理状态有关[2]。念珠菌种有很多成员，临床常见的致病念珠菌包括白色念珠菌，光滑念珠菌，都柏林念珠菌，吉利蒙念珠菌，葡萄牙念珠菌，近平滑念珠菌，乳酒念珠菌，克柔念珠菌，热带念珠菌[3]。但是口腔中检出最多的还是白色念珠菌，包括带菌状态和感染状态，估计白色念珠菌占口腔检出念珠菌的80%，近年来非白念的比例有增高的趋势。在对人类致病性上，除了白色念珠菌，非白色念珠菌的重要性越来越多的得到公认。光滑念珠菌和克柔念珠菌被认为对某些抗真菌药物的耐药性增强。都柏林念珠菌是最近才发现的致病菌，1995年，首次在HIV感染者的念珠菌性口腔粘膜炎症患者的口腔标本中共同分离出白色念珠菌和都柏林念珠菌。随着HIV感染人群的增多以及抑制免疫的化疗药物的广泛应用，人们对条件致病的真菌越来越重视[4]。因此，对念珠菌种的分离鉴定不仅可以进一步了解它的致病力，还可以知道该菌对抗真菌药物敏感性，具有重要意义[5-6]。本文对口腔标本中念珠菌的分离和鉴定方法做一个全面的回顾。 　　1念珠菌的致病力 　　念珠菌由非致病状态向致病状态转换的过程是复杂的，微妙的环境变化会导致其许多毒力因子的表达，这是宿主与菌体共同作用的结果，导致口腔念珠菌病的发生发展。无论患什么类型的念珠菌病，念珠菌只有能够停留在健康个体的粘膜表面才能发挥致病力，这一点在口腔尤为重要，因为口腔内的微生物每天都要对抗相对稳定的唾液的机械冲刷作用[7]。尽管有大量因素被证明可以促进念珠菌致病，但是没有一个是独立的致病因素。这些造成宿主细胞损伤的因素包括：念珠菌粘附相关因素（表面疏水性，粘附分子等），抵抗宿主的免疫（快速的表性转换，菌丝生长，补体分子粘附），释放水解酶（磷脂酶，天冬酰胺蛋白酶）。 　　2口腔黏膜念珠菌病 　　Samaranayake提出把口腔黏膜念珠菌病分成两类：一类是原发的口腔黏膜念珠菌病，病变局限在口腔黏膜，不累及皮肤及其他黏膜；另一类是继发口腔黏膜念珠菌病，病损不仅存在于口腔黏膜还累及口外部位，如皮肤等，这类疾病通常与免疫系统缺陷有关，临床上较不常见。第一类病损包括三种经典类型：伪膜型，红斑型以及增生型，增生型还被细分为斑块型和结节型[8]。 　　3口腔黏膜念珠菌病的诊断 　　口腔粘膜念珠菌病的诊断经常要靠临床特征，但是如果可能对样本进行微生物学检测则有助于定性及定量诊断念珠菌病，并且还可以对致病菌进行药敏试验。 　　4口腔念珠菌的分离方法 　　口腔念珠菌的分离方法包括：涂片法，棉拭子法，印迹培养法[9]，全唾液收集培养[10]，漱口水浓缩培养[11]以及活检。每种方法都各有优缺点，取样方法的选择取决于病损局部的状况。确立病损且容易暴露的创面适合棉拭子或者印迹培养法直接取材，因为这样可以准确提供病损部位的微生物信息。而病损不明显或者病损部位隐匿不容易直接取材者适合唾液培养或者漱口液浓缩培养。对于念珠菌负荷的定量可以采用印记培养、漱口水培养法来计数，以区分念珠菌带菌状态或者感染状态，如果念珠菌高负荷则考虑后者。Silverman等[12]将500CFU/mL漱口液作为临界参考值，这说明口腔念珠菌负荷大于500CFU/mL漱口液时，患者都出现口腔念珠菌病表现，国内徐岩英等则以菌落数大于300CFU/ml漱口液定为念珠菌感染。 　　5直接镜检 　　念珠菌的形态特征可作为鉴定的一方面，涂片可用于区分酵母样和菌丝体，比培养法敏感性[13]。KOH处理过的标本可显示出无色的带有45°分叉的菌丝。KOH标记荧光染料后，菌丝、酵母菌以及其他的菌体成分都会发荧光[14]。从病损局部取材的涂片经吉姆萨染色后，念珠菌的菌丝和酵母菌显示深蓝色；经过碘酸雪夫染色则显示红色或紫色[15]。对于慢性增生性粘膜念珠菌病，病损部位活检可经过碘酸雪夫染色或者六亚甲基四胺银染判断真菌侵入的深度，菌体成分被深染。真菌孢子、菌丝及假菌丝的存在就可以诊断感染真菌为念珠菌属，结合组织病理学特征则可以诊断为慢性增生性念珠菌[16]。 　　6实验室培养 　　6.1棉拭子法：病损局部的棉拭子法是相对简单的方法，用来检测念珠菌的生长以及半定量，取材方法为用灭菌的棉拭子轻轻地涂搽病损局部然后接种在沙氏平板培养基上[17]。 　　6.2漱口法：让患者用10mlPBS（0.01M，pH7.2）含漱1min吐出，然后经