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PAGE PAGE 15 《植物病理生理学》 第二章 病原生物的致病因子 PAGE 第二章 病原生物的致病因子 在适宜环境条件下，病原物对寄主植物致病能力大小取决于它们所具有致病因子多少和活性大小。病菌致病因子：酶、毒素、激素。 近年来，人们试图利用生物工程和基因工程手段研制各种酶、毒素的抑制因子或进行病菌致病基因改良、抗病突变体筛选等工作，探索防病、治病新途径。目前，从许多病原细菌中克隆出来的hrp基因，是病原菌对寄主的致病性和诱导非寄主植物产生过敏性反应（HR）必须的基因，具有病菌与植物互作的核心功能。 病原菌的致病因子的致病机理甚为复杂，首先要有对致病因子的性质的了解，才能考虑与寄主植物间的互作关系。所以必须建立在对病菌产生的酶、毒素、激素的本质及其作用机制的了解的基础上才能有效、有目的的提供分子生物学、分子遗传学的研究理论依据。因此，本章将系统介绍病原物产生的酶、毒素、激素的主要种类及其在病程中的作用机理。 第一节 酶 病原菌侵入寄主植物表皮和细胞需要各种酶，其中最主要的是：角质酶和细胞壁降解酶（果胶酶、半纤维素酶、纤维素酶、木质素降解酶和蛋白酶等）。 一、角质酶 植物体地上部分表皮的最外层是角质层，它主要是由直链的C16和C18羟基脂肪酸衍生出的难溶性多脂类化合物构成的角质组成。病原真菌直接侵入时用以突破这第一道屏障的酶就是角质酶。 主要从病原真菌分离得到，表2-1列出检测到的7属12种真菌产生角质酶。 表2-1 有角质酶活性的病原菌及其病害（7属12种） 病菌 寄主 病害 豌豆根腐镰孢（Fusarium solani pisi） 豌豆 豌豆根腐病 南瓜粉红镰孢（F. roseum sambucinum） 南瓜 南瓜赤霉病 小麦黄色镰孢（F. roseum culmorum） 小麦 小麦赤霉病 大麦根腐长蠕孢（Helminthosporium sativum） 大麦 大麦根腐病 马铃薯疮痂菌（Streptomyces scabies） 马铃薯 马铃薯疮痂病 盘长孢状刺盘孢（Colletotrichum gloeosporioides） 番木瓜 番木瓜炭疽病 辣椒刺盘孢（C. capsici） 辣椒 辣椒炭疽病 禾生刺盘孢（C. graminicolum） 玉米 玉米炭疽病 恶疫霉（Phytophthora cactorum） 苹果 苹果疫病 灰葡萄孢霉（Botrytis cinerea） 苹果 苹果灰霉病 灰葡萄孢霉（B. cinerea） 番茄 番茄灰霉病 苹果黑星菌（Venturia inequalis） 苹果 苹果黑星病 （一）角质酶分子特性 1、一般特性 酯酶 具同工酶（同工酶是指催化相同的化学反应,而酶蛋白的分子结构、理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。），如F. solani pisi 有2个同工酶。 不同病菌角质酶氨基酸组成基本相同：均含有1个蛋氨酸（Met）、1个组氨酸（His）、1个色氨酸（Trp）； 分子量：22—26kDa 角质酶：C端游离，N端不是游离（N端氨基酸通过酰胺键与葡萄糖醛酸连结，助于酶在胞外稳定） 2、催化特性 水解角质多聚体→寡聚体→单体 活性中心：三分体结构（三个基团）：丝氨酸残基上（羟基、羧基）和组氨酸（咪唑基） 实验设计：可通过抑制酶活性中心，来抑制酶的活性 （二）角质酶在病菌直接侵入中的作用 实验设计前提：已证实病菌可在离体下诱导产生角质酶。科研工作者从诱导或抑制角质酶的产生来证实病菌角质酶对寄主植物的作用。 1、侵入位点的确定（实验设计） 利用免疫技术和电镜观察： ①病菌孢子接种寄主； ②侵入后用角质酶抗血清处理侵入部位； ③电镜观察：侵入部位电子密集（抗原-抗体复合体：角质酶与抗血清结合）； ④证明角质酶存在。 如利用茄腐皮镰孢豌豆专化型菌(Fusarium solani f.sp.pisi)和胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)分别侵入豌豆和番木瓜的侵入位点都已发现了角质酶。 2、钝化角质酶阻止病菌侵入 实验设计：角质酶抗血清和酶抑制因子与病菌孢子悬液混合，病菌角质酶活性被钝化，说明病菌产生角质酶。 例子：克瘟散、苯来特杀菌剂在离体条件下抑制角质酶活性，阻止病菌侵染。 3、角质酶缺失突变株的产生 实验设计： 病原菌 ↓（用紫外线/化学药剂处理） 角质酶缺失突变菌株→（接种）①表皮完整植株→不发病 →（接种）②表皮损伤植株→发病，产生病斑 说明：病菌是依靠角质酶进行侵染的。 4、角质酶缺失突变株致病力的恢复 如果病菌是依靠角质酶侵染植物表皮的，那么在病菌角质酶缺失突变株中加入外源角质酶应该能恢复其致病力。 例子：F. solani pisi：T-8对豌豆