第二十篇药物的体外抗菌试验.pptVIP

第二十章 药物的体外抗菌试验 药物的体外抗菌试验（antimicrobial test in vitro） 是在体外测定微生物对药物敏感程度的实验，已广泛地应用于科研、生产和临床。 如：抗菌药物的筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的测定、药物含量的测定、药物浓度的测定、指导临床用药的药敏实验等。 抗菌实验包括抑菌实验和杀菌实验。 抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微生物，在药物除去后微生物又能生长； 杀菌：即能杀死微生物，当药物除去后，微生物也不能再生长繁殖。 两者并非绝对，只是在一定条件下相对而言。 第一节 常用的体外抑菌实验 体外抑菌实验是最常用的抗菌实验，方法简便，需时短，用药量少，不需要动物和特殊设备，一般在玻璃器皿中进行。 常用的方法有连续稀释法和琼脂扩散法。 一、连续稀释法（serial dilution test）） 可用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。可以用液体培养基，也可用固体培养基。 1、液体培养基连续稀释法 在一系列试管中，将液体培养基按一定的倍数稀释药物，获得药物浓度递减的系列试管，然后在每一管中加入定量实验菌，经培养一定时间后，肉眼观察试管混浊情况，记录抑制实验菌生长的最低浓度（即MIC）。 图 20-1液体培养基连续稀释法 2）斜面法 是固体培养基上连续稀释法的一种，是将系列浓度的各药分别混入固体培养基中制成斜面，在斜面上接种一定量的实验菌，然后观察是否有菌生长，判断MIC值。 二、琼脂扩散法（agar diffusion test ） 是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，在药物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离，以抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作用强弱的原理设计而成，具有各种不同的方法。 常用的有以下几种： 1、滤纸片法 琼脂扩散法中最常用方法 适用于新药的初筛实验（初步判断药物是否与抗药作用）及临床的药敏实验（细菌对药物的敏感性实验，以便选择用药），可进行多种药物或一种药物不同浓度对同一种实验菌的抗菌实验。 首先将实验菌均匀混入琼脂培养基，制成含菌平板，然后将一定大小的滤纸片蘸取药液置于平板上，培养后即可观察结果。根据抑菌圈直径的大小，评价药物抗菌作用的强弱。 WHO于1981年曾推荐Kirby-Bauer 法（k-B法）作为标准化的药敏实验。 k-B法基本原理是滤纸片法，但需用统一的培养基、菌液浓度、纸片质量、纸片含药量以及其他实验条件。结果判断以卡尺精确量取，根据抑菌圈的直径大小判断该菌对药物是抗药、中等敏感或敏感。 2、打孔法 2、打孔法 在含琼脂平板上打孔，孔内加入药液，经培养后可产生一定大小的抑菌圈。适于药物血浓度的监测，血清用量少，敏感性高，操作简便。 3、挖沟法 先制备琼脂平板，在平板上挖沟，沟的两边垂直划线接种各种实验菌，再在沟内加入药液。培养后根据沟两边所生长的实验菌离沟的抑菌距离来判断对这些菌的抗菌效力。适用于在一个平板上实验一种药物对几种实验菌的抗菌作用。H:\其他--中药妇炎乐药敏实验结果 第二节 杀菌试验 一、最低杀菌浓度或最低致死浓度的测定 杀菌实验用以评价药物对微生物的致死活性。 最低杀菌浓度指该药物能杀死细菌的最低浓度。 从对微生物广义而言，也可称之为最低致死浓度（MLC）。一般是将待检药物先以合适的液体培养基在试管内进行连续稀释，每管内再加入一定量的试验菌液，培养后可得该药物的MIC，取MIC终点以上未长菌的各管培养液，分别移种于另一无菌平板上图20-1，培养后凡平板上无菌生长的药物最低浓度即为该药物的MBC（或MLC）  MBC（或MLC）的含义也可定义为在一定条件下，使绝大多数微生物被杀死，但允许有最少量微生物存活的药物最低浓度。 据此进行实验时，在药物连续稀释后，每管内加入定量实验活菌液（105-106细菌/ml）。培养后从肉眼观察无菌生长的试管内各取培养液0.1ml或0.01ml涂布于平板上测定存活菌数，以使99.9%微生物致死的药物最低浓度为MLC，即在一定条件下，存活的菌数不多于原始接种数的0.1%. 二、活菌计数法（viable counting method） 是在一定浓度的定量药物内加入定量的实验菌，作用一定时间后，取样进行活菌计数，从存活的微生物数计算出药物对微生物的致死率。 活菌计数的方法：一般是取实验菌与药物作用后的混合液，经稀释后取定量混入琼脂培养基，倾注成平板。