表达纯化与酶学性质.PDFVIP

微生物学通报 Dec. 20, 2018, 45(12): 2585−2591 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180099 研究报告 来源于 Rhinocladiella mackenziei 的玉米赤霉烯酮水解酶的 表达纯化与酶学性质 1,2 2 2 2 2 1* 2* 胡翔颖 刘文婷 刘卫东 詹秀倩 郭瑞庭 李华钟 郑迎迎 (1. 工业生物技术教育部重点实验室 江南大学生物工程学院 江苏 无锡 214122) (2. 工业酶国家工程实验室 中国科学院天津工业生物技术研究所 天津 300308) 摘 要：【背景】玉米赤霉烯酮(Zearalenone ，ZEN)是污染最广泛的霉菌毒素之一，对饲料行业和 畜牧业造成了巨大的经济损失。目前研究最为广泛的玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101 因其热稳定性 较差，无法满足工业应用上的要求。【目的】为实现玉米赤霉烯酮降解酶在工业上的应用，寻找酶 学性质更突出的ZEN 降解酶。【方法】基于对GenBank 数据库的挖掘，发现一个来源于麦氏喙枝 孢霉(Rhinocladiella mackenziei CBS 650.93)的Rmzhd 基因，构建pET-46-Rmzhd 质粒。利用大肠杆 菌表达体系和亲和层析、离子交换纯化体系对蛋白进行表达和纯化，通过高效液相凝胶色谱分析 酶学性质。【结果】发现一个新的ZEN 水解酶RmZHD ，RmZHD 在pH 8.6 和45 °C 条件下的活性 最高，而且具有较高的耐热性。结构分析表明，较高的盐桥数目和溶剂暴露脯氨酸含量可能是造 成其高耐热性的原因。【结论】本研究为促进玉米赤霉烯酮降解酶在工业上的应用打下基础。 关键词：玉米赤霉烯酮水解酶，表达纯化，酶学性质，热稳定性 Expression, purification and characterization of a novel zearalenone hydrolase from Rhinocladiella mackenziei HU Xiang-Ying1,2 LIU Wen-Ting2 LIU Wei-Dong2 ZHAN Xiu-Qian2 GUO Rui-Ting2 LI Hua-Zhong1* ZHENG Ying-Ying2* (1. Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China) (2. Industrial Enzymes National Engineering Laboratory, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China) Abstract: [Background] Zearalenone (ZEN)