掌握碱裂解法抽提质粒的原理.pptVIP

能自主复制； 有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点； 具有两个以上的遗传标记，便于重组体的筛选和鉴定； 分子量小，以容纳较大的外源DNA。 质粒的复制型 质粒在细胞内的复制一般有两种类型: 严谨型(Stringent control) ：只在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体复制一次时，质粒也复制一次，每个细胞内只有1～2个质粒 松弛型(Relaxed control) ：质粒在整个细胞周期中随时可以复制，当染色体复制停止后，质粒仍然能继续复制，每个细胞中含有10-200个拷贝。 实验目的 掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各主要试剂的作用。 提纯的思路 质粒的特性：共价、闭合、环状的小分子量DNA 要去除的物质： 　蛋白 　基因组DNA 　RNA 实验原理 碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异来分离它们。 在碱性pH，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开；质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条链不会完全分离。 当用pH4.8的KAc或NaAc高盐缓冲液调节其pH值到中性时，质粒DNA分子能够迅速准确地复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；而线状染色体DNA则不能复性，形成缠绕的网状物，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物一起沉淀下来而被除去。 再用酚氯仿抽提进