目的基因的PCR扩增.pptVIP

实验三、目的基因的PCR扩增 1、掌握PCR反应的基本原理与实验操作技术 2、学习PCR扩增仪的使用 一、实验目的 聚合酶链式反应(PCR)是一种体外DNA扩增技术，具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等特点。 PCR工作原理类似于DNA的体内复制过程，是将待扩增的DNA片段和与其两侧的已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷酸,将该寡核苷酸作为引物，引物序列将决定扩增序列片段的特异性和片段长度。 二、实验原理 PCR（聚合酶链式反应）包括3个基本步骤： ⑴ 模板变性（ 92℃-96℃ ）：目的双链DNA片段在94℃下解链； ⑵ 退火（37℃-65℃）：寡核苷酸引物在适当温度（50℃左右）下与模板上的目的序列通过氢键配对，形成局部双链； ⑶ 延伸（72℃）： 在TaqDNA聚合酶合成DNA的最适温度下，以目的DNA为模板，dNTP为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的DNA链。 由这3个基本步骤组成一轮循环，理论上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍，这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板，所以经25—35轮循环就可使DNA扩增达106倍。 Melting 94 oC Melting 94 oC Annealing Primers 50 oC Extension 72 oC Temperature 100 0 50 T i m