第二章DNA重组克隆单元操作载体.ppt

第二章DNA重组克隆的单元操作 赵晓梅 第一节载体 （Vectors） 基因工程对宿主细胞的要求 克隆载体的种类 （一）质粒的基本特征 1、质粒的自主复制性 （一）质粒的基本特征 2、可扩增性 质粒DNA上的复制子结构决定了质粒与寄主的对应关系，根据在每个细胞中的分子数（拷贝数）多寡，质粒可分为两大复制类型： 严紧型复制 1 - 3 拷贝 stringent plasmid 松弛型复制 30 - 50 拷贝 relaxed plasmid （一）质粒的基本特征 3、可转移性 革兰氏阴性菌的质粒可分成两大类： 接合型质粒 能在天然条件下自发地从一个细胞转移到另一个细胞（接合作用），如F、Col、R质粒等。 非接合型质粒 不能在天然条件下独立地发生接合作用如Col、R的其它成员。 值得注意的是，某些非接合型质粒（ColE1）在接合型质粒的存在和协助下，也能发生DNA转移，这个过程依赖于mob 基因产物与其他蛋白因子的相互作用。 质粒的不相容性：分子机制 两种含有不同复制子结构的不同质粒，在复制时各受自己的拷贝数控制系统的调节，致使两种质粒的最终拷贝数恒定，因此在经过若干复制周期和细胞分裂周期后仍能共处于同一细胞内。 两种含有相似复制子结构的不同质粒，在复制时受到同一种拷贝数控制系