血糖测定邻甲苯胺.pptVIP

血液中葡萄糖的测定 ——邻甲苯胺法 ;一、实验目的 ;二、 实验原理;;血糖的来源、去路;; ;高血糖症与糖尿病;糖尿病（diabetes mellitus,DM） 定义：是一种慢性、复杂的代谢紊乱性疾病，系胰岛素相对或绝对不足，或利用缺陷引起。 临床特征：血糖持续升高，甚至出现糖尿。长期患有糖尿病常有脂类、蛋白质代谢紊乱以及眼、肾的微血管病变及神经病变等并发症。严重者还可出现水、电解质紊乱及酸碱平衡紊乱，表现为高脂血症，酮症酸中毒等，重者可致死亡。 ;糖尿病的分类;两类原发性糖尿病的特征;;（一）无机化学法（氧化还原法）;（二）有机化学法（缩合法）;邻甲苯胺法;（三）酶 法;方法 类型 原 理 用途及备注 葡萄糖氧 定量 G+O2 → GA+H2O2 与HK法有最佳 　化酶氧消 电化学 用O2电极作极谱测定， 相关性 　耗法 　 动态 求O2的消耗量 　（CX3生化仪） 　　 终点 葡萄糖脱 定量 G + NAD+→GA + NADH 偶有使用 　氢酶（GDH）分光 　　（340nm）可自动化分析 　法 　 动态;;;;;三、实验器材 分光光度计（630nm），比色皿 计算纸（9 cm×9 cm） 3. 水浴锅 4. 10ml容量瓶 四、实验试剂 1. 邻甲苯胺溶液 2.5g硫脲溶于冰醋酸，加入邻甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml，用冰醋酸定容至1升 2. 葡萄糖标准母液 （10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制） 3. 血清 （～100ml）;;五、实验步骤 取5支10ml容量瓶，标号，依次加入葡萄糖母液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0ml，用饱和苯甲酸稀释至10ml，混匀（则上述溶液100ml葡萄糖含量为25，50，100，200，300mg ）； 混匀后，置沸水中 15分钟，立即移入冷水浴中冷却； 以0号管调零，在630nm 处比色（见下表），以各管的 吸光度为纵坐标，相应管中葡萄糖含量（mg）为横坐标，绘制标准曲线，并根据测定管吸光度查找含量。;;六、注意事项 1. 本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，血液中其他还原性物质基本上无影响。 2. 邻甲苯胺试剂与葡萄糖显色的深浅及其稳定性与试剂中邻甲苯胺浓度、冰醋酸浓度、加热时间有关。此法显色稳定，24小时??无变化。如将加热时间缩短，生成颜色容易消褪。 3. 轻度溶血的血清对结果无明显影响。根据推导，血清中含血红蛋白 450毫克/100毫升时，可使测定结果降低约10%。 4.高脂血的标本最后显色有时会出现浑浊，影响测定结果。可先制备血滤液后再行测定。;