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- 2019-08-03 发布于浙江
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;;知识体系构建;DNA连接酶;基因工程与蛋白质工程;1.掌握基因工程的3种基本工具
(1)限制性核酸内切酶:识别特定核苷酸序列,并在特定位点上切割DNA分子。
(2)DNA连接酶:①E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端;②T4 DNA连接酶能连接黏性末端和平末端。
(3)载体:①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制;②有一个至多个限制酶切割位点;③具有特殊的标记基因——以便对含目的基因的受体细胞进行筛选。;提醒 (1)限制酶≠DNA酶≠解旋酶
限制酶是切割某种特定的脱氧核苷酸序列,并使两条链在特定的位置断开;DNA酶是将DNA水解为基本组成单位;解旋酶是将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。
(2)使用限制酶的注意点
①一般用同种限制酶切割载体和目的基因。
②不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。
(3)DNA连接酶≠DNA聚合酶
DNA连接酶连接两个DNA片段,而DNA聚合酶只能将单个??氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。;2.理清基因工程的操作流程
(1)获取目的基因的3种途径
①从基因文库中获取。
②利用PCR技术扩增。
③化学方法人工合成。;提醒 (1)PCR技术扩增
①原理:DNA双链复制。
②条件:模板DNA、引物、脱氧核苷酸、热稳定性DNA聚合酶。;(2)基因表达载体的构建——重组质粒的构建
①基因表达载体的组成;②构建过程;(3)根据受体种类确定基因工程的受体细
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