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人工種子的生產程序:以大豆為例
誘導 Induction
選擇營養體材料: 發育中綠色略透明的嫩胚,通常長度不要超過5mm者
培養條件:光照不要太強,以 5-10 μE m-2 s-1最適
培養基
Murashige and Skoog salts
B5 vitamins
sucrose, 3%?????
2,4-D, 40 mg/l
gellan gum, 0.2%?
pH 7.0
增殖? Proliferation
取密集而在球體胚期者進行分瓶增殖培養
固態培養基
Murashige and Skoog salts
B5 vitamins
sucrose, 3%
2,4-D, 20 mg/l
gellan gum, 0.2%?
pH 5.8
液態培養基
Finer Nagasawa Lite macro salts
Murashige Skoog micro salts
B5 vitamins
asparagine, 1 g/l
2,4-D, 5 mg/l
sucrose, 1%
pH 5.8
組織分化與成熟 Histodifferentiation Maturation
固態培養基
組織分化:去除前述培養基中的生長激素後,球狀體胚即開始進行分化。通常在此培養基培養7天。
Murashige and Skoog salts
B5 vitamins
maltose,? 6%?
活性碳 0.5%?
gellan gum, 0.2%?
pH 5.8
成熟:體胚達子葉期時移到本培養基,約6-8週後綠色轉成乳黃綠,即為成熟。
Murashige and Skoog salts
B5 vitamins
maltose, 6%?
gellan gum, 0.2%
pH 5.8
或者
液態培養基
取直徑約3 mm的球狀體胚分離之,然後置於三角瓶中以本培養基使分化成熟。約5週後體胚就可達成熟。
FN Lite macro salts
Murashige and Skoog micro salts
B5 vitamins
glutamine, 30 mM (filter-sterilize)
methionine, 2 mM?
sucrose, 3%?
sorbitol, 3%?
pH 5.8
乾燥 Desiccation
將體胚取出放於置有飽和KCl溶液的乾燥器(R.H. 85%)中緩慢乾燥。
造粒 Coating
在營養液中加入sodium alginate,投入以體胚,然後將個別的夾出放入CaCl2溶液中約40分鐘後即可凝固。
營養體的選擇:
幼胚:如大豆、山茶花
成熟種子:如Eucalyptus dunnii 、Fraxinus americana
芽:如Aralia elata、
葉片:如Quercus rebra、
專利:
美國專利局的一些資料:
1 6,200,809 Maturation of somatic embryos
2 6,119,395 End seals for manufacturing seed
3 6,071,746 Regeneration of somatic embryos from plant tissues
4 5,985,667 Maturation, desiccation and encapsulation of gymnosperm somatic embryos
8 5,840,581 Process for somatic embryogenesis of sweetgum
10 5,737,872 Formulation for synthetic seed
11 5,732,505 Manufactured seed comprising desiccated and/or frozen plant tissue
12 5,701,699 Manufactured seed with enhanced pre-emergence survivability
14 5,666,762 Respiration-limited manufactured seed
16 5,572,827 Method for applying hydrogel coatings to embryonic plants
總之,回顧有關人工種子的研究迄今已有二十多年的歷史,也已經獲得許多有價值的結果,雖然以體胚系統作為人工種子生產系統仍為目前應用發展的主流,然而延伸包被技術至單極性繁植體尤其是不能形成體胚發生的種類,也已經漸受重視。前瞻在二十一
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