下调miR-17-5p影响骨肉瘤细胞迁移、侵袭、增殖的实验研究.pdf

摘 要 ①miR-17-5p inhibitor 组：转染 miR-17-5p inhibitor agomir 。②NC 组：转染 miR-17-5p inhibitor negative control 。③Blank 组：只转染进去脂质体试剂。 4.采用CCK-8 实验方法，法检测三组MG63 细胞增殖情况，观测三组实验 细胞的增殖情况是否存在差异性。 5.采用流式细胞术和Tunel 实验技术，对比观测三组骨肉瘤细胞MG63 的凋 亡是否存在差异性。 6.利用细胞划痕实验，观测三组骨肉瘤细胞MG63 的迁移能力是否存在差异 性。 7.通过Transwell 实验方法，观测三组骨肉瘤细胞MG63 的侵袭能力是否产 生李差异性。 8.运用TargetScan 软件和miRanda 信息库的生物信息学软件对miR-17-5p 的 作用靶标进行预测。根据预测结果构建出含有SRCIN1 的3’UTR 区的野生型和 突变型的人工重组双荧光素酶基因学载体，分成两组，分别将其与 miR-17-5p agomir 和miR-17-5p negative control 一起转染入人骨肉瘤细胞株MG63 中，并利 用Western blot 实验检测技术和双荧光素酶报告技术原理，证实SRCIN1 蛋白正 是miR-17-5p 的作用靶标目的蛋白。 9.采用Western blot 实验原理，检测三组细胞中SRCIN1 的表达情况。 结果 1.与骨肉瘤瘤旁边组织相比，在骨肉瘤病理组织中，miR-17-5p 的相对含量 升高明显(P0.01) ；SRCIN1 的mRNA 相对含量下降明显(P0.01) 。骨肉瘤病理 组织中SRCIN1 的蛋白表达水平较骨肉瘤旁边的病理组织明显降低。 2. 在人骨肉瘤细胞株 MG63 中，miR-17-5p 的表达明显高于成骨细胞 hFOB1.19(P0.01) ，SRCIN1 的mRNA 表达明显低于成骨细胞hFOB1.19(P0.01) 。 3.转染miR-17-5P inhibitor agomir 后，miR-17-5p inhibitor 转染组的miR-17-5p 表达水平显著低于NC 组和Blank 组，其差异具有统计学意义(P0.01) 。结果表 明骨肉瘤细胞在转染miR-17-5p inhibitor 后，miR-17-5p 的表达水平明显降低。 4.在CCK-8 （Cell Counting Kit ）细胞增殖实验中，与NC 组和Blank 组相比 较，转染miR-17-5P inhibitor 实验组中，骨肉瘤细胞在OD450 处的吸光光度值明 显下降，差异具有统计学意义(P0.05) ；而NC 组和Blank 组间相比较后发现， III 万方数据 摘 要 两组骨肉瘤细胞的吸光光度数值间的差异不大，差异没有统计学意义(P0.05) 。 5.流式细胞技术和Tunel 实验检测细胞凋亡结果显示，与NC 组和Blank 组 比较，转染miR-17-5p inhibitor 实验组的骨肉瘤细胞的细胞凋亡率明显高于NC 组和Blank 组，其间的差异具有统计学意义(P0.01) ，而NC 组和Blank 组间骨 肉瘤细胞的凋亡率差别不大，差异没有统计学意义(P0.05) 。 6.Transwell 实验的结果表明，与NC 组和Blank 组相比较，转染miR-17-5P inhibitor 实验组，其穿过基底膜的骨肉瘤细胞数明显相对较少，其差异具有统计 学意义(P0.05) 。NC 组和 Blank 组穿过基底膜的细胞数大致相当，期间的差异