DNA重组技术基本工具和基本操作程序.pptVIP

1.连接酶的作用： 原核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 3.导入微生物细胞 (2)优点 (3)常用受体细胞 (1)过程 制备感受态细胞：用Ca2+（CaCl2）处理细菌，使细菌易于接受外源DNA分子。 重组DNA分子与感受态细胞混合，完成转化。 (Ca2+ 处理法) 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少、操作简单、价格低廉。 大肠杆菌（E.coli） （四）目的基因的检测与鉴定 检测 ①导入检测：目的基因是否导入受体细胞 方法—— DNA分子杂交 ②表达检测 转录检测——分子杂交 翻译检测——抗原抗体杂交 分子检测法 鉴定 抗虫鉴定 抗病鉴定 活性鉴定等 个体水平的鉴定 1.用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。下列叙述 不正确的是 （ ） A.常用相同的限制性核酸内切酶处理目的基因和质粒 B.导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达 C.DNA连接酶和 RNA聚合酶是构建重组质粒必需的工具酶 D.可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒 C 2.科学家常选用的细菌质粒往往带有一个抗菌素抗性基 因，该抗性基因的主要作用是（ ） A、提高受体细胞在自然环境中的耐热性 B、有利于检测目的基因是否导入受体细胞 C、增加质粒分子的相对分子质量 D、便于与外源基因连接 B 3.下图是基因工程主要技术环节的一个基本步骤，这一步需用到的工具是（ ） A、DNA连接酶和解旋酶 B、DNA聚合酶和限制性核酸内切酶 C、限制性核酸内切酶和DNA连接酶 D、DNA聚合酶和RNA聚合酶 C 4．下列有关基因工程技术的正确叙述是（ ） A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和载体 B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快 D．只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达 C 5.科学家运用基因工程技术将人胰岛素基因与大肠杆菌的 质粒DNA分子重组，并且在大肠杆菌体内获得成功表达。 胰岛素基因与大肠杆菌质粒DNA彼此能结合的依据是（ ） A．基因自由组合定律 B．半保留复制原则 C．基因分离定律 D． 碱基互补配对原则 D 6.2003年在中国大地上最惨烈的事件就是“非典”侵袭、 肆虐着人体的健康，夺取了许多人宝贵的生命。医院人 满为患，“非典”与“发热”、“疑似”混杂在一起，让医生 难以区分。我国科学工作者日夜奋战，利用基因工程迅 速研制出“非典”诊断盒。其作用机理是??? （?? ） A．治疗“非典”利用的是抗原—抗体反应 B．诊断“非典”利用的是DNA分子杂交原理 C．诊断“非典”利用的是抗原—抗体反应 D．治疗“非典”利用的是DNA分子杂交原理 B * * 基因工程是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。（P1） 抗虫棉 普通棉 原理 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 基因工程的概念 一、 DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” ── “分子缝合针” ── “分子运输车” ── 限制酶 DNA连接酶 基因进入受体细胞的载体 （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1.分布： 2.特点： 专一性，即能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且切割每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，使之断开。 主要从原核生物中分离纯化出来的一类酶。 G A A T T C C T T A A G G C T T A A G A A T T C C C C G G G G G G C C C C C C G G G G G G C C C ︰ ︰ ︰ ︰ ︰ 中轴线 ︰ ︰ ︰ ︰ ↓ ↑ EcoRⅠ （在G与A之间切割） SmaⅠ （在G与C之间切割） 粘性末端 平末端 ↓ ↑ 在识别序列中轴线两侧切割，产生粘性末端； 在识别序列中轴线处切割，产生平末端。 3. 结果： 思考 　　要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 两个切口， 四个黏性末端。 G C T T A A A A T T C G