基因工程的原理及技术.pptVIP

专题一 基因工程 一、基因工程的原理及技术 2、技术： （1）基本工具 注意： 1：获取目的基因需剪切几次？产生几个黏 性末端或平末端？ 2：能否在标记基因内插入目的基因？ 连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 （恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键） 作用：将外源基因送入受体细胞 条件： （1）能在宿主细胞内复制并稳定地保存 （2）具有一个或多个限制酶切点 （3）具有某些标记基因 （4）载体必须安全，不会对受体细胞有害 种类：质粒、噬菌体和动植物病毒 1.细胞染色体外能自主复制的小型环状DNA分子 2.质粒是基因工程中最常用的运载体 3.最常用的质粒是大肠杆菌的质粒 4.存在于许多细菌及酵母菌等生物中 5.质粒的存在对宿主细胞无影响 6.质粒的复制只能在宿主细胞内完成 3、目前转基因工程可以 A. 打破地理隔离但不能突破生殖隔离 B. 打破生殖隔离但不能突破地理隔离 C. 完全突破地理隔离和生殖隔离 D. 部分突破地理隔离和生殖隔离 四、蛋白质工程 （一）蛋白质工程崛起的缘由 基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。这些天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的，它们的结构和功能符合特定物种生存的需要，却不一 定完全符合人类生产和生活的需要。 如：胰岛素、干扰素、生长素 例子： 干扰素在体外保存困难 玉米中赖氨酸含量比较低 （二） 蛋白质工程的基本原理 1、概念： 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基 础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质，以满足人类对生产和生活的需求。 2、基本原理 ： （1）确定蛋白质的功能→蛋白质应有的高级结构→蛋白质应具备的折叠状态→应有的氨基酸序列→应有的碱基排列， 创造自然界不存在的蛋白质。 （2）其与基因工程的比较： 基因工程是遵循中心法则， 从DNA→mRNA→蛋白质→折叠产生功能， 生产出自然界已有的蛋白质。 C 3.（2013全国卷大纲版）下列实践活动包含基因工程技术的是 A.水稻F1花药经培养和染色体加倍，获得基因型纯合新品种 B.抗虫小麦与矮秆小麦杂交，通过基因重组获得抗虫矮秆小麦 C.将含抗病基因的重组DNA导入玉米细胞，经组织培养获得抗病植株 D.用射线照射大豆使其基因结构发生改变，获得种子性状发生变异的大豆 A 4． (2012·浙江卷，6)天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是 (　　) A．提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因B C．利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞 D．将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞 　C 5．(2011·浙江卷，6)将ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是 (　　) A．每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B．每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C．每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada D．每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 　D 6．下列一般不作为基因工程中的标记基因的是 (　　) A．四环素抗性基因 B．绿色荧光蛋白基因 C．产物具有颜色反应的基因 D．贮藏蛋白的基因 　C 7．如图表示利用农杆菌转化法获得某种转基因植物的部分操作步骤。以下说法错误的是(　　) A．利用含有四环素的培养基可将含Ⅱ的细菌筛选出来 B．Ⅲ是农杆菌，通过步骤③将目的基因导入植株 C．⑥可与多个核糖体结合，并可以同时翻译出多种蛋白质 D．①过程的完成需要限制酶和DNA连接酶的参与 　A 8．研究人员将鱼的抗冻基因导入番茄体内，获得抗冻能力明显提高的番茄新品种。下列操作合理的是 (　　) A．设计相应DNA单链片段作为引物，利用PCR技术扩增目的基因 B．利用限制酶和DNA聚合酶构建基因表达载体 C．将基因表达载体导入番茄细胞之前需用Ca2＋处理细胞 D．运用DNA分子杂交技术检测抗冻基因是否在番茄细胞中表达 3． (2012·新课标全国卷，40)根据基因工程的有关知识，回答下列问题： (1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有____________和____________。 (2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下： AATTC……G 　　　　　　G……CTTAA 为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ