动物寄生虫病学兽医寄生虫实验技术.pptVIP

血液内原虫检查法 寄生于血液中的伊氏锥虫、梨形虫和住白细胞虫，一般可采血检查。采血部位：牛、羊、猪，犬、猫和兔均可选用耳静脉，小白鼠取尾尖，禽类取翅静脉。检查方法有以下各种： 1.直接镜检法 将采出的血液滴在洁净的载玻片上，加等量的生理盐水与之混合，加上盖玻片，立即放显微镜下用低倍镜检查，发现有运动的可疑虫体时，可再换高倍镜检查。为增加血液中虫体活动性，可以将玻片在火焰上方略加温。此法适用于检查伊氏锥虫。 2.涂片染色镜检法 涂片 ① 采血部位用酒精棉球消毒，再用消毒针头采血，滴于洁净的载玻片一端； ② 另取一块边缘光滑的载玻片，作为推片。先将此推片的一端置于血滴的前方，然后稍向后移动，触及血滴，使血均匀分布于两玻片之间，形成一线； ③ 推片于载玻片形成30～45度角，平稳快速向前推进，使血液循接触面散布均匀，即形成血薄片； ④ 抹片后，自然干燥，滴加甲醇固定。 2）平皿法 特别适用于球状粪便。 操作如下： ① 取粪便3～10个； ② 放于培氏皿或表面玻璃上； ③ 加少量40℃温水； ④ l0～15min后移去粪球； ⑤ 将留下的液体在低倍镜下检查。 用上述两种方法检查时，可见到运动活泼的幼虫，如欲将其致死，做较详细的观察，可在有幼虫的载玻片上，滴上卢戈氏碘液，则幼虫很快死亡，并染成棕黄色。 3）注意事项 ① 若是检查组织器官材料，应尽量撕碎，但检查粪便时，则将完整粪球放入，不必弄碎，以免渣子落人小试管底部，镜检时不易观察。 ② 温水必须充满整个小试管和乳胶管，并使其浸泡住被检材料(使水不致流出为止)，中间不得有气泡或空隙。 ③ 为了静态观察幼虫形态构造，可用酒精灯加热或滴入少量碘液，将载片上的幼虫杀死后进行观察。 （2）粪便培养法 该法主要用于研究蠕虫卵或幼虫的生物学特性，鉴别线虫等。另外，做人工寄生性线虫感染试验时，也要用到幼虫培养技术。 1）操作如下： ① 取新鲜粪便若干，弄碎置培氏皿中央堆成半球状，顶部略高出； ② 然后在培氏皿内边缘加水少许（如粪便稀可不必加水），加盖盖好使粪与培氏皿接触； ③ 放入25～30℃的温箱内培养 (夏天放置室内亦可)； ④ 每日观察粪便是否干燥，要保持适宜的湿度； ⑤ 经7～15天，第三期幼虫即可出现，它们从粪便中出来，爬到培氏皿的盖上或四周； ⑥ 用胶帽吸管吸上生理盐水把幼虫冲洗下来，滴在载玻片上覆以盖片，在显微镜下进行观察。 2）注意事项： ① 培养皿及培养基的选择：培养幼虫时如无培氏皿。将小平皿（去掉盖）加上粪便放于大平皿中央，大平皿内加少许水，然后用大平皿盖盖上，即可进行培养。 ② 培养温度及培养基的选择：培氏皿内，在25～30℃的温箱中进行培育。培氏皿内须预先放好培养基。对于吸虫卵、绦虫卵、棘头虫卵和大多数线虫卵，可用水或生理盐水做培养基。最好的培养基是灭菌的粪便或粪汁，尤以后者为佳。 粪便和粪汁的灭菌方法是100℃的温度下煮沸2h。粪汁接种虫卵或幼虫之前，须先用棉絮过滤。 （3）毛蚴孵化法 毛蚴孵化法是专门用来诊断血吸虫病的，其原理是将含有血吸虫卵的粪便在适宜的温度条件下进行孵化，等毛蚴从虫卵内孵出来后，借着蚴虫向上、向光、向清的特性，进行观察，做出诊断。 1）常规沉孵法 操作如下： ① 取新鲜粪便100g，置500ml容器内； ② 加水调成糊状，通过40～60目铜筛过滤至另一个容器内； ③ 加水至九成满，静置沉淀30min； ④ 之后将上清液倒掉，再加清水搅匀，沉淀20min； ⑤ 如此反复3或4次； ⑥ 最后将上述反复淘洗后的沉淀材料加30℃的温水置于三角烧杯中，瓶口用中央插有玻璃管的胶塞塞上(或用搪瓷杯加硬纸片盖上倒插试管的办法)，杯内的水量以至杯口2cm处为宜，且使玻璃管或试管中必须有一段漏出的水柱； ⑦ 后放入25～35℃的温箱中孵化； ⑧ 30min后开始观察水柱内是否有毛蚴；如没有，以后每1h观察1次，共观察数次。任何一次发现毛蚴，即可停止观察。 2）棉析毛蚴孵化法 操作如下： ① 取粪便50g，经反复淘洗或锦纶筛淘洗后（不淘洗也可）； ② 将粪渣移入300mL的平底孵化瓶中，灌注25℃的清水至瓶颈下部； ③ 在液面上方塞一薄层脱脂棉，大小以塞住瓶颈下部不浮动为宜； ④ 再缓慢加入20℃清水至瓶口l～3mm处，如棉层上面水中有粪便浮动，可将这部分水吸去再加清水，然后进行孵化。 棉析毛蚴孵化法装置示意图（引自秦建华，李国清等，2005） 1. 水平面 2. 棉花3. 浊水层 4. 粪渣 3）注意事项： ① 被检粪便务必新鲜，不可触地污染，洗粪容器不宜过小，免得增加换水次数，影响