第五章发酵产物的提取与精制(PPT-114).pptVIP

（2）色谱柱和流动相的选择 色谱柱的选择，主要考虑被分离组分分子量的差异，选用相应的柱长与柱内径之比的色谱柱。对于组别分离的色谱柱，由于被分离的组分分子量差别较大可采用短粗的色谱柱；对组分分级分离的色谱柱，用细长的色谱柱。 凝胶色谱所使用的缓冲溶液比较简单，一般只使用一种缓冲液。但是在选择缓冲溶液时主要考虑三方面的因素。 考虑被分离物质的稳定性，包括缓冲液的pH、离子强度及保护剂等。 考虑凝胶介质的稳定性能，不与介质发生化学反应、不变形、不降解。 考虑分离物质的后处理，被分离组分经凝胶色谱分离后还需采用其他色谱方法进行分离，最好选用与后续色谱方法相同的缓冲液。如果后处理是冷冻干燥，可选用易挥发性的溶液，如NH4HCO3、NH4OH等。 （3）凝胶介质的后处理 色谱柱在使用一段时间后必须做适当的处理，除去凝胶表面的污染物。 处理所用的溶液和溶液浓度略有不同，一般对交联的葡聚糖凝胶类介质可以用0.1 mol/L NaOH和0.5 mol/L NaCl混合处理，聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶类介质可以用0.5-1 mol/L NaCl溶液处理。 凝胶柱内的色谱介质一般浸泡在溶液中，容易长菌。为了避免微生物的生长，残留在凝胶柱内的磷酸盐和有机物必须要洗净，然后将色谱柱真空或低温保存。 防止微生物生长最常用的方法是在凝胶溶液中加入一定的抑菌剂，如0.02%叠氮钠、0.01-0.02%三氯丁醇等。 凝胶色谱介质如果在较长时间不使用，可以将其干燥长期保存。使用过的凝胶色谱介质，首先按一般的再生程序将介质再生处理、漂洗干净，然后用乙醇从低浓度到高浓度逐级脱水（先后用30%、50%、70%、80%、95%无水乙醇、乙醚），脱水后的介质在室温下晾干，将乙醇（乙醚）挥发尽即可。 内容 1.概述 2.原料与预处理 3.固液分离 4.细胞破碎 5.初步纯化 6.精细纯化 7.成品加工 7.1结晶技术 结晶的目的就是为了获得更纯净的固体的发酵产品。由于结晶过程具有高度选择性，因此析出的晶体纯度非常高。 7.1.1 结晶的基本原理 晶体：许多性质相同的粒子在空间有规律地排列成格子状的固体。 结晶的全过程应包括形成过饱和溶液、晶核形成和晶体生长等三个阶段。溶液达到过饱和后，过量的溶质才会以固体态结晶出来。晶体的产生最初形成极细小的晶核，然后这些晶核再成长为一定大小形状的晶体。 和过饱和曲线把温度-浓度图分成三个区域: 饱和曲线稳定区：不会发生结晶 不稳定区：结晶能自动进行 介稳区：在稳定区与不稳定区之间 若在结晶过程中晶核的形成速率大于晶体的成长速率，则产一般晶中的晶体小而数目多；反之亦然。 图 5-12 饱和曲线与过饱和曲线 7.1.2 工业发酵中常用的结晶方法 结晶法优点：成本较低、设备较简单、操作方便。 结晶的首要条件是过饱和，创造过饱和条件在工业生产中常用的方法是将热饱和溶液冷却、添加晶种结晶、将部分溶剂蒸发结晶、添加有机溶剂结晶、盐析结晶等。 7.2 浓缩 浓缩：将低溶质浓度的溶液通过除去溶剂变为高溶质浓度的溶液。 发酵工业中常用的浓缩方法有蒸发浓缩法、冷冻浓缩法、吸收浓缩法等。 7.2.1蒸发浓缩法 蒸发：使溶液中的溶剂在一定的温度和压力下加热后汽化除去，从而提高溶液中的溶质浓度。 影响蒸发速率的因素 ①温度 ②蒸发面积有关，液体表面积越大，单位时间内汽化的分子越多，蒸发越快 ③蒸汽压。当液面上的溶剂蒸汽分子密度很小，处于不饱和的低压状态时，溶液中的溶剂分子就会不断地汽化逸出，以维持其一定的饱和蒸汽压。 蒸发浓缩装置常按照加热、扩大液面表面积、减压和加速空气流动等因素而设计。对于热敏性发酵产品的浓缩，常采用真空减压蒸发、薄膜蒸发以及分子蒸馏等方法进行。 7.2.1.1分子蒸馏 原理：液体分子受热会从液面逸出，而不同种类的分子在气相中运动的平均自由程不同来达到分离的目的。 分子蒸馏的原理是根据分子运动理论，液体混合物的分子受热后运动会加剧，当接受到足够能量时，就会从液面逸出而成为气相分子。随着液面上方气相分子的增加，有一部分气体就会返回液体。在外界条件保持恒定情况下，最终会达到分子运动的动态平衡。 分子运动的平均自由程与分子的有效直径的平方成反比。此时如果在小分子能达到而大分子不能达到的距离上放一冷凝器，将小分子冷凝为液体，不断从气相中分离，平衡就被打破，液相混合物中的分子又会逸出成为气相分子。只要时间足够长，混合物就被分离提纯了。 主要结构由加热器、捕集器、高真空系统组成。 图5-13分子蒸馏的原理 7.2.2冷冻浓缩法 原理：是利用水溶液在共晶点前，部分水分呈冰晶析出的原理，来提高提取液的浓度。 冷冻的温度越低，析出的冰晶越多，溶液的浓度也愈高。提取液的浓度要求，可由析出的冰晶数量（即去水量