医学遗传学遗传病诊断.ppt

Am J Hum Genet. 2007 Feb;80(2):345-52. Epub 2007 Jan 4 * ? 母体外周血中胎儿细胞的分析，可用于鉴定性别和检测常见的染色体数目畸变。随着单克隆抗体、流式细胞仪和PCR技术的发展，使从孕妇外周血中分离富集胎儿细胞的技术已趋向成熟，研究结果表明通过胎盘屏障进入母循环的胎儿细胞有三种是主要的，即滋养叶细胞、淋巴细胞和胎儿有核红细胞。据报道可利用抗转铁蛋白受体的单克隆荧光抗体标记，经流式细胞计数分离到胎儿单个有核红细胞。应用其它的胎儿细胞表面标记物（如人类白细胞抗原系统HLA、HAL-DR4，抗滋养叶细胞抗体H315、H316、BDOG2、OKT9等）分离母体外周血中胎儿细胞也在研究和应用中。经分离纯化与富集到的胎儿细胞可采用超微量DNA提取、PCR扩增以后，进行SRY基因检测和进行一些单基因病的产前诊断。亦有报道可应用染色体特异性DNA探针对分离到的胎儿细胞进行荧光原位杂交（FISH）检测常见的染色体数目畸变。研究表明早孕33～40天即可在母血中检测出胎儿细胞成分。但认为从外周血中分离纯化胎儿有核红细胞的最佳时期在妊娠10～18周。提示可在早孕期经母血分离胎儿细胞进行遗传性疾病的产前诊断。 * ● 极体活检 　　卵子在完成第一次减数分裂时排出第一极体（PB），在卵子收获24小时内，PCR或FISH技术检测第一极体，再将诊断为正常的胚胎植入子宫。尤其适合于染色体平衡易位的病人。卵子基因型的测定是间接的，它是从对PB的分析中推论而来。取出PB并不影响卵子的正常发育与受精，而且，由于它并不是对胚胎本身进行操作，更易在心理和伦理上为一些夫妇所接受。由于取材较早，可有更多的时间进行分析。这种技术的缺点是，它不能用来分析男性常染色体显性遗传病或X连锁遗传病的性别决定。位于染色体端粒位置的单基因遗传病，在减数分裂期间染色体互换发生频率较高，当不均等数目的染色体互换发生均会导致杂合子极体形成。因此受精后形成的第二极体的检测成为必要。另外，在常染色体隐性遗传病中只有50%的胚胎进行移植。 治疗程序： 1.促排卵 2.取卵 3.取出第一极体进行分子生物学诊断 4.体外授精及胚胎培养 5.取出第二极体进行分子生物学诊断 6.分析卵子和受精卵是否携带异常遗传信息 7.移植正常胚胎 * 来自胚胎卵裂阶段的卵裂球是临床上最常用的PGD诊断遗传病的方法。在此方法中，先用激素刺激超排卵后取出卵子，用常规IVF或ICSI受精。16-18小时后，卵子可见到双原核，体外继续培养至受精后第三天，受精卵达到8-10细胞期。每个胚胎移出一个或两个卵裂球，用PCR或FISH方法进行检测。在检测期间受检的胚胎继续培养。在第三天晚2-3个正常胚胎被植入子宫。 这种方法的优点是：在体外培养的大多数胚胎均可达到6-8细胞期。在此阶段的每个卵裂球都被认为是全能的，一个或两个卵裂球的移去不会影响胚胎的进一步发育。若在更早阶段进行活检，由于胚胎的卵裂球较少，对胚胎的损伤较大。这种方法的缺点是，材料少，只可有1-2个卵裂球进行检测。另外，在一些情况下，对于嵌合体胚胎，卵裂阶段单个卵裂球的检测并不能代表整个胚胎的状态。因此，胚胎的非整倍体嵌合将导致漏诊和异常胚胎的移植。两个卵裂球的检测可减少漏诊，提高PGD的可靠性 * 囊胚期活检 胚胎培养至较晚的细胞阶段（受精后5-6天），可从囊胚的滋养外胚层分离部分细胞进行检测。分离细胞数可达10个，这为检测提供了更多的材料。此阶段的胚胎已分化为滋养外胚层和内细胞团，活检材料已取不到内细胞团。但是，只有不到50%的正常受精卵可在体外发育到这个阶段，这也许是由于培养条件的原因。 * * 遗传异质性：表型相同，但是基因型不同，如：视网膜色素变性（retinitis pigmentosa,RP）是最常见的致盲的单基因遗传眼病之一，主要表现为视网膜萎缩、夜盲和视野缩小，多为双眼发病，致中年或老年进完全失明。RP的遗传方式具有遗传异质性，即可以有AD、AR、XR连锁遗传，可能还有Y连锁遗传。遗传方式不同的RP，一般其遗传基础也不同，因而伴随的综合征的以及始发年龄、主要病情变化特征（XR常伴高度近视，AR和AD多为低度近视）、病程进展（AD快，AR慢）、预后情况（AD较轻，AR致盲）也有差异，甚至还可区分为其他不同亚型。 * * * * The basic principle behind 2nd Generation Sequencing is to take a genome, fragment it, ligate to each end adapter (anchor primers) to create a librar