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药学微生物基础教案 上课时间: 200 年 月 日 授课内容：第六章 微生物代谢产物的测定技术 授 课 人: 汪穗福 任教班级: 2005 级 班 课 时:　　 课 型:　新授课 教学媒体: 第六章 微生物代谢产物的测定技术 教学目标：　１、微生物代谢产物的测定技术 　２、知道微生物的致病性。 　 第一节 理论基础 微生物 一、微生物的代谢产物1．分解代谢产物及应用 不同的微生物，其自身含有的酶系统不同，因此，在利用营养物质进行代谢时产生的代谢产物也不完全相同。 (2)发酵试验 (2)吲哚试验 营养物质中的色氨酸 (3)甲基红试验 葡萄糖分解产生丙酮酸 (4) VP试验 丙酮酸 (在碱性溶液中) (5)枸橼酸盐利用试验 唯一碳源 吲哚试验 、甲基红试验 、VP试验 、枸橼酸盐利用试验 通常统称为I、M、VI、C生化试验。在鉴定上使用广泛。 大肠埃希菌 I、M、VI、C生化试验录像 2.合成代谢产物及临床意义 　除了合成多糖、蛋白质、脂肪、核酸、细胞壁及各种辅酶等自身成分外 (1)热原质 　　　热原质即菌体中的脂多糖，大多是革兰氏阴性菌产生的。注入人或动物体内能引起发热反应，故名热原质。热原质耐高热，高压蒸汽灭菌（121℃，20′）不能使其破坏，加热（180℃4h;250℃45′;650℃1′）才使热原质失去作用。热原质可通过一般细菌滤器，但没有挥发性，所以，除去热原质最好的方法是蒸馏。药液、水等被细菌污染后，即使高压灭菌或经滤过除菌仍可有热原质存在，输注机体后可引起严重发热反应。生物制品或注射液制成后除去热原质比较困难，所以，必须使用无热原质水制备。 (2)毒素与酶 　　细菌可产生内、外毒素及侵袭性酶，与细菌的致病性密切相关。 　　内毒素即革兰阴性菌细胞壁的脂多糖，其毒性成分为类脂A。菌体死亡崩解后释放出来。外毒素是由革兰阳性菌及少数革兰阴性菌在生长代谢过程中释放至菌体外的蛋白质。具有抗原性强、毒性强、作用特异性强的突出特点。 　　某些细菌可产生具有侵袭性的酶，能损伤机体组织，促进细菌的侵袭、扩散，是细菌重要的致病因素，如链球菌的透明质酸酶等。 （3）色素 　　有些细菌能产生色素，对细菌的鉴别有一定意义。 　细菌色素有两类： 　　　①水溶性色素，可使培养基带上相应的颜色，如绿脓杆菌产生的绿脓色素使培养基或脓汗呈绿色。 　　　②脂溶性色素，不溶于水，仅保持在菌落内使之呈色而培养基颜色不变，如金黄色葡萄球菌色素。 （4）抗生素　　某些微生物代谢过程中可产生一种能抑制或杀死某些其他微生物或癌细胞的物质，称抗生素。抗生素多由放线菌和真菌产生，细菌仅产生少数几种，如多粘菌素、杆菌肽等。 （5）细菌素 　　某些细菌能产生一种仅作用于有近缘关系的细菌的抗菌物质，称细菌素。细菌素为蛋白类物质，抗菌范围很窄，无治疗意义，但可用于细菌分型和流行病学调查。细菌素以生产菌而命名。大肠埃希菌产生的细菌素称大肠菌素，绿脓杆菌产生的称绿脓菌素，霍乱弧菌产生的称霍乱菌素。 二、微生物的致病性 　病原菌的致病性 表6-1 细菌外毒素和内毒素比较 第二节 微生物内毒素测定的操作 一、操作目的 鲎的血变形细胞中含有两种物质，即高相对分子质量的凝固酶原和凝固蛋白原，凝固酶原被内毒素激活转化成具有活性的凝固酶，在凝固酶的酶解作用下，将凝固蛋白原转化成凝固蛋白，凝固蛋白又通过交联酶作用互相聚合而形成牢固的凝胶。可简单表示如下： 　　　　内毒素 　　 ↓ 　凝固酶原-----→凝固酶 　 　　　　　↓ 　　　凝固蛋白质-----→凝固蛋白 　 　　　　交联酶↓ 　 　　　　　 凝　胶 三、操作用仪器及试剂 　1．仪器  超净工作台，分析天平（万分之一） ， 细菌内毒素定量测定仪?，电热干燥箱， 旋涡混合器， 三角瓶， 凝集管（10mm×75mm）， 小试管（16mm×100mm）， 移液管（或刻度吸管、定量移液器）, 大口径试管，水浴恒温器或干热恒温器， 试管架， 计时器, 洗耳球, 封口膜或金属试管帽 , 脱脂棉，吸水纸，剪刀，砂轮等。 2．试剂 　　 (1)　细菌内毒素国家标准品（RSE），系指自大埃希杆菌提取精制得到的内毒素。用于标定细菌内毒素工作标准品（CSE）的效价和标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度。 　(2)　细菌内毒素工作标准品系指以细菌内毒素国家标准品为基准进行标定，确定其重量的相当效价。每1ng工作标准品效价应