PCR技术原理及PCR仪的应用.ppt

* * * * 荧光定量PCR检测c-fos mRNA表达，这是c-fos荧光定量标准品扩增曲线、标准曲线、融解曲线 * 这是内参GAPDH荧光定量标准品扩增曲线、标准曲线、融解曲线， 可以看见扩增效率高，标准曲线线性关系好，无特异性扩增和引物二聚体。说明PCR反应特异性好，定量准确。 SYBR Green 1（绿色荧光染料） （三）SYBR Green I 工作原理 SYBR Green 1 结合到双链DNA的小沟部位 在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量 G T T T G G C C C C C C C A A A G G G A C T T G A T A G C A T C G T A A Extension 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ Extension Continued Apply Excitation Wavelength 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 5’ Taq Taq 3’ 5’ 3’ Taq Taq 5’ 5’ Repeat BD BD BD BD BD BD BD BD BD BD l l l l l A 制作标准曲线 将逆转录得到