马铃薯甲虫(Leptinotarsa+decemlineata)保幼激素降解酶基因的分子克隆及功能分析.pdf

decemlineata)保幼激素降解酶基因的分子克隆及功能分析 马铃薯5P、(Leptinotarsa 1．1供试昆虫…………………………………………………………………一46 1．2实验试剂和仪器设备……………………………………………………一46 1．3马铃薯甲虫保幼激素二醇激酶基因片段的克隆验证…………………一46 1．4马铃薯甲虫保幼激素二醇激酶cDNA的全长克隆……………………．．47 1．5马铃薯甲虫保幼激素二醇激酶的RNA干扰……………………………48 1．6实时荧光定量PCR………………………………………………………一48 1．7血淋巴中保幼激素含量的测定…………………………………………一49 2结果与分析………………………………………………………………………．50 2．1马铃薯甲虫保幼激素二醇激酶基因的克隆和进化分析………………一50 2．2马铃薯甲虫保幼激素二醇激酶基因的时空表达分析…………………．．53 2．3马铃薯甲虫保幼激素二醇激酶的RNA干扰效应………………………55 3讨{仑…………………………………………………………………………………………………………．56 筇四章马铃薯甲虫羧酸酯酶基因的分子克隆以及对保幼激素酯酶的筛选…………59 l材料与方法………………………………………………………………………．．61 1．1供试昆虫…………………………………………………………………一61 1．2实验试剂和仪器设备……………………………………………………一6l 1．3马铃薯甲虫酯酶序列的筛选和验证……………………………………一62 1．4氟虫腈和三氟氯氰菊酯药剂试验………………………………………．．64 1．5实时荧光定量PCR………………………………………………………一65 1．6马铃薯甲虫保幼激素酯酶基因片段的全长克隆………………………．．67 2结果与分析………………………………………………………………………。68 2．1马铃薯甲虫中CCE家族基因的鉴定及分类……………………………．68 2．2马铃薯甲虫中氟虫腈诱导的CCE基因…………………………………．74 2．3马铃薯甲虫中对三氟氯氰菊酯敏感的CCE基因………………………．75 2．4马铃薯甲虫保幼激素酯酶相关基因的序列分析………………………一76 2．5马铃薯甲虫保幼激素酯酶基因的时空表达分析………………………一78 3讨论…………………………………………………………………………………………………………．80 全文总结…………………………………………………………………………………一83 参考文献…………………………………………………………………………………一85 攻读硕士学位期间发表的相关学术论文………………………………………………101 致谢…………………………………………………………………………………………………………………．103 万方数据 摘要 马铃薯甲虫保幼激素降解酶基因的分子克隆及功能分析 摘 要 保幼激素(Juvenile hormone，JH)调控昆虫生长、发育、变态和生殖。血淋巴中保 幼激素的滴度是由保幼激素的合成和代谢共同维持和平衡。JH的降解主要通过三个 酶完成：保幼激素酯酶、保幼激素环氧化水解酶和保幼激素二醇激酶。本文采用生物 信息学和分子生物学技术，获得了保幼激素环氧化水解酶和保幼激素二醇激酶的全长 cDNA序列，并通过RNA干扰技术验证了二者的功能。同时，我们也克隆了一个可 能的保幼激素酯酶基因。结果如下。 1、马铃薯甲虫保幼激素环氧化水解酶基因的分子克隆及其功能分析 克隆了马铃薯甲虫保幼激素环氧化水解酶的两条cDNA序列，并将其分别命名为 在胸肌、脑．心侧体．咽侧体复合体、前肠、中肠、后肠、腹神经节、马氏管、脂肪体、 铃薯甲虫的不同发